Chapitre II : Matériels et Méthodes
23
II.2.3. Réactivation de la souche performante
Un fragment de colonies de la souche performante est ensemencé dans un milieu LB liquide de
volume de 30-100 mL, dans les conditions aseptiques. Les cultures sont incubées à 37°C et une
agitation de 150 tr/min (ou en statique) pendant une nuit. Dans ces conditions, la densité optique
(à 600 nm) des cultures sera située entre 0.6 -1, ce qui garantit de prélever un inoculum du débit
de la phase logarithmique de croissance bactérienne (Annexe I- Figure 4).
II.2.4. Production d’hydrolysat protéique par la souche performante
Deux techniques de production d’hydrolysat protéique ont été testées, en utilisant la souche
performante et sa protéase. Le but est de comparer les rendements de production de chaque
technique.
II.2.4.1. Production brute
Dans cette technique, la production de protéase et l’hydrolyse de substrat protéique ce fait
simultanément. Plusieurs milieux de production ont été testés afin de produire le maximum
d’hydrolysats protéiques.
5 mL d’inoculum de la souche performante a été ajouté dans les milieux M1, M2, M3 (Figure II1). Un suivi journalier de la production de la protéase a été effectué pour une période de 5 jours.
A la fin, les milieux sont filtrés à travers un papier filtre, le filtrat a été récupéré et congelé à -18
°C puis lyophilisé. Les hydrolysats protéiques obtenus sont stockés à un endroit sec jusqu’à une
utilisation ultérieure (caractérisation biochimique).
Les rendements de production d’hydrolysats de la matière ont été estimés (pour les milieux M2
et M3) par mesure la masse résiduelle des co-produits de crevette après élimination du culot
bactérien. Pour cela, le résidu des milieux est séché à 105 °C à poids constant (1-2 heures),
ensemble avec 1,5 g de PDC. Ils ont ensuite refroidi au dessiccateur puis pesés. Les essais sont
réalisés en duplicatas. La quantité de substrat protéique hydrolysée est donnée par la formule
suivante :
Q : La quantité de la matière hydrolysée (%).
M : le poids moyen des deux repliquats de PDC séchés.
M résidu : le poids moyen des deux repliquats de PDC résiduelle de M2 ou M3.
23
II.2.3. Réactivation de la souche performante
Un fragment de colonies de la souche performante est ensemencé dans un milieu LB liquide de
volume de 30-100 mL, dans les conditions aseptiques. Les cultures sont incubées à 37°C et une
agitation de 150 tr/min (ou en statique) pendant une nuit. Dans ces conditions, la densité optique
(à 600 nm) des cultures sera située entre 0.6 -1, ce qui garantit de prélever un inoculum du débit
de la phase logarithmique de croissance bactérienne (Annexe I- Figure 4).
II.2.4. Production d’hydrolysat protéique par la souche performante
Deux techniques de production d’hydrolysat protéique ont été testées, en utilisant la souche
performante et sa protéase. Le but est de comparer les rendements de production de chaque
technique.
II.2.4.1. Production brute
Dans cette technique, la production de protéase et l’hydrolyse de substrat protéique ce fait
simultanément. Plusieurs milieux de production ont été testés afin de produire le maximum
d’hydrolysats protéiques.
5 mL d’inoculum de la souche performante a été ajouté dans les milieux M1, M2, M3 (Figure II1). Un suivi journalier de la production de la protéase a été effectué pour une période de 5 jours.
A la fin, les milieux sont filtrés à travers un papier filtre, le filtrat a été récupéré et congelé à -18
°C puis lyophilisé. Les hydrolysats protéiques obtenus sont stockés à un endroit sec jusqu’à une
utilisation ultérieure (caractérisation biochimique).
Les rendements de production d’hydrolysats de la matière ont été estimés (pour les milieux M2
et M3) par mesure la masse résiduelle des co-produits de crevette après élimination du culot
bactérien. Pour cela, le résidu des milieux est séché à 105 °C à poids constant (1-2 heures),
ensemble avec 1,5 g de PDC. Ils ont ensuite refroidi au dessiccateur puis pesés. Les essais sont
réalisés en duplicatas. La quantité de substrat protéique hydrolysée est donnée par la formule
suivante :
Q : La quantité de la matière hydrolysée (%).
M : le poids moyen des deux repliquats de PDC séchés.
M résidu : le poids moyen des deux repliquats de PDC résiduelle de M2 ou M3.