Chapitre II : Matériels et Méthodes
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II.1.3. Milieux de cultures
Différents milieux sont préparés pour la conservation des souches bactériennes, le criblage et la
dégradation de substrat protéique par les protéases bactériennes. Leurs compositions sont
indiquées comme suit :
Luria-Bertani (LB) : 10 g peptone ; 5 g extrait de levure ; 30 g NaCl dans 1L d’eau
distillée. Le pH du milieu est ajusté à 7,0 ± 0,2 avec une solution de la soude caustique de 1
mol/L. Pour la préparation du LB solide, 20g d’agar sont ajoutées au milieu. Le milieu est
stérilisé à l’autoclave à une température de 121 °C pendant 20 min.
Gélose nutritive au lait (GNL) : 5 g peptone ; 3 g extrait de levure et 20 g d’agar dans 750
mL d’eau distillée. Le pH du milieu est ajusté à 7,0 ± 0,2 avec du NaOH (1 mol/L). Après
stérilisation à l’autoclave à une température de 121 °C pendant 20 min et refroidissement
du milieu à une température avoisinante 50 °C, on ajoute 250 mL du lait écrémé
commercial (stérile) et on mélange bien les deux solutions.
M1 : 15 g de la poudre de déchet de crevette (PDC) dans 1 L d’eau distillée. Le pH du
milieu est ajusté à 7,4 avec une solution d’acide chlorhydrique de 1 mol/L. Le milieu est
stérilisé à l’autoclave dans les mêmes conditions.
M2 : 15 g PDC et 10 g glucose dans 1 L d’eau distillée. Le pH du milieu est ajusté à 7,4
avec d’une solution HCl (1 mol/L). Le milieu est stérilisé à l’autoclave dans les mêmes
conditions.
M3 : 15 g PDC ; 1.5 g K 2 HPO 4 ; 1.5 g KH 2 PO 4 ; 1.5 g MgSO 4 et 1.5 g NaCl dans 1 L d’eau
distillée. Le pH du milieu est ajusté à 7,4 avec une solution d’acide chlorhydrique (1
mol/L). Le milieu est stérilisé à l’autoclave dans les mêmes conditions.
M4 : 15 g PDC et 10 g sucre roux dans 1 L d’eau distillée. Le pH du milieu est ajusté à 7,4
avec une solution d’acide chlorhydrique de 1 mol/L. Le milieu est stérilisé à l’autoclave
dans les mêmes conditions.
H1 : 18 g de caséine ; 3 g de lait écrémé en poudre et 0,5g K 2 HPO 4 dans 1 L d’eau distillée.
Le pH du milieu est ajusté à 7,4 avec une solution de NaOH (1 mol/L). Le milieu est
stérilisé à l’autoclave dans les mêmes conditions.
H2 : 1,5 g PDC ; 0,05 g de de K 2 HPO 4 dans 95 mL d’eau distillée. Le pH du milieu est
ajusté à 7±0,4 avec une solution de HCl (1 mol/l). Le milieu est stérilisé à l’autoclave à 121
°C pendant 20 min. 5ml de lait écrémé liquide stérile est ajouté au milieu après
refroidissement à 50 °C.
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II.1.3. Milieux de cultures
Différents milieux sont préparés pour la conservation des souches bactériennes, le criblage et la
dégradation de substrat protéique par les protéases bactériennes. Leurs compositions sont
indiquées comme suit :
Luria-Bertani (LB) : 10 g peptone ; 5 g extrait de levure ; 30 g NaCl dans 1L d’eau
distillée. Le pH du milieu est ajusté à 7,0 ± 0,2 avec une solution de la soude caustique de 1
mol/L. Pour la préparation du LB solide, 20g d’agar sont ajoutées au milieu. Le milieu est
stérilisé à l’autoclave à une température de 121 °C pendant 20 min.
Gélose nutritive au lait (GNL) : 5 g peptone ; 3 g extrait de levure et 20 g d’agar dans 750
mL d’eau distillée. Le pH du milieu est ajusté à 7,0 ± 0,2 avec du NaOH (1 mol/L). Après
stérilisation à l’autoclave à une température de 121 °C pendant 20 min et refroidissement
du milieu à une température avoisinante 50 °C, on ajoute 250 mL du lait écrémé
commercial (stérile) et on mélange bien les deux solutions.
M1 : 15 g de la poudre de déchet de crevette (PDC) dans 1 L d’eau distillée. Le pH du
milieu est ajusté à 7,4 avec une solution d’acide chlorhydrique de 1 mol/L. Le milieu est
stérilisé à l’autoclave dans les mêmes conditions.
M2 : 15 g PDC et 10 g glucose dans 1 L d’eau distillée. Le pH du milieu est ajusté à 7,4
avec d’une solution HCl (1 mol/L). Le milieu est stérilisé à l’autoclave dans les mêmes
conditions.
M3 : 15 g PDC ; 1.5 g K 2 HPO 4 ; 1.5 g KH 2 PO 4 ; 1.5 g MgSO 4 et 1.5 g NaCl dans 1 L d’eau
distillée. Le pH du milieu est ajusté à 7,4 avec une solution d’acide chlorhydrique (1
mol/L). Le milieu est stérilisé à l’autoclave dans les mêmes conditions.
M4 : 15 g PDC et 10 g sucre roux dans 1 L d’eau distillée. Le pH du milieu est ajusté à 7,4
avec une solution d’acide chlorhydrique de 1 mol/L. Le milieu est stérilisé à l’autoclave
dans les mêmes conditions.
H1 : 18 g de caséine ; 3 g de lait écrémé en poudre et 0,5g K 2 HPO 4 dans 1 L d’eau distillée.
Le pH du milieu est ajusté à 7,4 avec une solution de NaOH (1 mol/L). Le milieu est
stérilisé à l’autoclave dans les mêmes conditions.
H2 : 1,5 g PDC ; 0,05 g de de K 2 HPO 4 dans 95 mL d’eau distillée. Le pH du milieu est
ajusté à 7±0,4 avec une solution de HCl (1 mol/l). Le milieu est stérilisé à l’autoclave à 121
°C pendant 20 min. 5ml de lait écrémé liquide stérile est ajouté au milieu après
refroidissement à 50 °C.