Matériels et méthodes
Extraction des substances actives
99
b. Purification par chromatographie sur colonne
Cette phase de purification est réalisée sur une colonne de chromatographie (NS 12.5; 2.5
mm, lenz) contenant des billes d’amberlite XAD-4 préalablement conditionnées avec le
méthanol et avec l'eau bi-distillée. Afin de procéder à la purification l’échantillon aqueux est
déposé sur la colonne, puis il est lavé avec de l’eau bi-distillée pour éliminer les sels
inorganiques et par du méthanol (100 %) pour décrocher les saponines des billes. La phase
méthanolique recueillie est évaporée et dissoute dans l’eau bi-distillée.
c. purification avec l’iso-butanol
Afin d’améliorer la pureté des saponines une extraction liquide-liquide avec de l’iso-butanol
est réalisée. Au cours de ce partitionnage densitométrique les saponines migrent dans la phase
isobutanolique que nous récupérons. L’iso butanol est évaporé et les résidus blancs récupérés
forment des saponines brutes.
II.4.1.1. Estimation de la teneur totale des saponines
Afin d’estimer la quantité des saponines totale, chaque extrait issu de la dernière extraction
liquide-liquide avec l’iso-butanol est re-dissoute dans l’eau, puis lyophilisé dans des ballons à
fond rond.
Les résultats concernant la quantité des saponines brutes extraites sont déterminés selon le
Code des normes alimentaires (Kwon et al., 2003). En fait, des ballons à fond rond ont été
séchés à 105 ◦C, refroidi dans un dessiccateur et pesés à poids constant avant la lyophilisation.
Une fois la lyophilisation terminée, les flacons ont été pesés une seconde fois; la différence de
poids correspond à la quantité totale de saponine dans l'échantillon (M.ex en mg).
Les résultats concernant la quantité des saponines extraites sont donnés sous forme de teneur
de saponine totale par un gramme de matière lyophilisée de l’étoile de mer:
Q TS (mg/g) =
M.ex (mg)
M.mat−prem (g)
(í µí¿)
Avec:
Q TS (mg/g): Quantité des saponines totales en mg/g de matrice sec;
M.ex: Masse d’extrait de saponine;
Mmat-prem: Masse de la matrice première (lyophilisat).
Extraction des substances actives
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b. Purification par chromatographie sur colonne
Cette phase de purification est réalisée sur une colonne de chromatographie (NS 12.5; 2.5
mm, lenz) contenant des billes d’amberlite XAD-4 préalablement conditionnées avec le
méthanol et avec l'eau bi-distillée. Afin de procéder à la purification l’échantillon aqueux est
déposé sur la colonne, puis il est lavé avec de l’eau bi-distillée pour éliminer les sels
inorganiques et par du méthanol (100 %) pour décrocher les saponines des billes. La phase
méthanolique recueillie est évaporée et dissoute dans l’eau bi-distillée.
c. purification avec l’iso-butanol
Afin d’améliorer la pureté des saponines une extraction liquide-liquide avec de l’iso-butanol
est réalisée. Au cours de ce partitionnage densitométrique les saponines migrent dans la phase
isobutanolique que nous récupérons. L’iso butanol est évaporé et les résidus blancs récupérés
forment des saponines brutes.
II.4.1.1. Estimation de la teneur totale des saponines
Afin d’estimer la quantité des saponines totale, chaque extrait issu de la dernière extraction
liquide-liquide avec l’iso-butanol est re-dissoute dans l’eau, puis lyophilisé dans des ballons à
fond rond.
Les résultats concernant la quantité des saponines brutes extraites sont déterminés selon le
Code des normes alimentaires (Kwon et al., 2003). En fait, des ballons à fond rond ont été
séchés à 105 ◦C, refroidi dans un dessiccateur et pesés à poids constant avant la lyophilisation.
Une fois la lyophilisation terminée, les flacons ont été pesés une seconde fois; la différence de
poids correspond à la quantité totale de saponine dans l'échantillon (M.ex en mg).
Les résultats concernant la quantité des saponines extraites sont donnés sous forme de teneur
de saponine totale par un gramme de matière lyophilisée de l’étoile de mer:
Q TS (mg/g) =
M.ex (mg)
M.mat−prem (g)
(í µí¿)
Avec:
Q TS (mg/g): Quantité des saponines totales en mg/g de matrice sec;
M.ex: Masse d’extrait de saponine;
Mmat-prem: Masse de la matrice première (lyophilisat).