Matériels et méthodes
Extraction des substances actives
98
II.4.1. Isolement des saponines
Cette purification est basée sur les protocoles décrits par Demeyer et al., 2014; Van Dyck et
al.,2009 et Lide, 2009 pour obtenir des saponines à partir d’un extrait méthanolique.
Selon ces auteurs les étapes de purification peuvent être décrites comme suit:
a- Purification par extraction liquide-liquide
Dans cette étape trois extractions liquide-liquide sont réalisées au départ de l’extrait
méthanolique en augmentant à chaque fois la polarité du solvant d’extraction (n-hexane 0,09,
D, dichlorométhane 1,60 D, chloroforme 1,04 D). Les saponines restent dans le méthanol
(1,70 D) pour chacune de ces extractions (Lide, 2009).
Première extraction liquide-liquide
Afin d’éliminer les composés les mois polaires que les saponines et les composés apolaires le
premier partitionnage est réalisé entre l’extrait méthanolique et le n-hexane (v/v).
Le mélange (extrait méthanolique, n-hexane) est agité vigoureusement et laissé dans une
ampoule à décanter pour permettre la séparation des phases. Une fois que les deux phases sont
bien distinguées on les récupère.
La phase inférieure (fraction méthanolique, fraction A) est utilisée pour l’isolement
des saponines (Fig. 17).
La phase supérieure (fraction hexanique, fraction B) est utilisée pour l’isolement des
caroténoïdes (voir partie II.4.2) (Fig. 17).
Le volume de la fraction méthanolique est mesuré, puis l’extraction avec le n-hexane est
répétée jusqu’au à ce que la phase méthanolique inférieure devient incolore.
Le volume final de la fraction méthanolique (A) est ajusté à 20 % avec l’eau bi-distillée.
Deuxième extraction liquide-liquide
Le deuxième partitionnage a été réalisé entre la fraction méthanolique (A) et le
dichlorométhane. Dans cette nouvelle séparation densimétrique la phase méthanolique est
récupérée et son volume est ajusté à 40% avec de l’eau bi-distillée.
Troisième extraction liquide-liquide
La dernière séparation a été réalisée entre la solution méthanolique récupérée précédemment
et le chloroforme. L’extrait méthanolique final récupéré est roto-évaporé, puis re-dissoute
dans l’eau bi-distillée (extrait aqueux).
Extraction des substances actives
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II.4.1. Isolement des saponines
Cette purification est basée sur les protocoles décrits par Demeyer et al., 2014; Van Dyck et
al.,2009 et Lide, 2009 pour obtenir des saponines à partir d’un extrait méthanolique.
Selon ces auteurs les étapes de purification peuvent être décrites comme suit:
a- Purification par extraction liquide-liquide
Dans cette étape trois extractions liquide-liquide sont réalisées au départ de l’extrait
méthanolique en augmentant à chaque fois la polarité du solvant d’extraction (n-hexane 0,09,
D, dichlorométhane 1,60 D, chloroforme 1,04 D). Les saponines restent dans le méthanol
(1,70 D) pour chacune de ces extractions (Lide, 2009).
Première extraction liquide-liquide
Afin d’éliminer les composés les mois polaires que les saponines et les composés apolaires le
premier partitionnage est réalisé entre l’extrait méthanolique et le n-hexane (v/v).
Le mélange (extrait méthanolique, n-hexane) est agité vigoureusement et laissé dans une
ampoule à décanter pour permettre la séparation des phases. Une fois que les deux phases sont
bien distinguées on les récupère.
La phase inférieure (fraction méthanolique, fraction A) est utilisée pour l’isolement
des saponines (Fig. 17).
La phase supérieure (fraction hexanique, fraction B) est utilisée pour l’isolement des
caroténoïdes (voir partie II.4.2) (Fig. 17).
Le volume de la fraction méthanolique est mesuré, puis l’extraction avec le n-hexane est
répétée jusqu’au à ce que la phase méthanolique inférieure devient incolore.
Le volume final de la fraction méthanolique (A) est ajusté à 20 % avec l’eau bi-distillée.
Deuxième extraction liquide-liquide
Le deuxième partitionnage a été réalisé entre la fraction méthanolique (A) et le
dichlorométhane. Dans cette nouvelle séparation densimétrique la phase méthanolique est
récupérée et son volume est ajusté à 40% avec de l’eau bi-distillée.
Troisième extraction liquide-liquide
La dernière séparation a été réalisée entre la solution méthanolique récupérée précédemment
et le chloroforme. L’extrait méthanolique final récupéré est roto-évaporé, puis re-dissoute
dans l’eau bi-distillée (extrait aqueux).