Matériels et méthodes
Extraction des substances actives
100
a. Étude quantitative des saponines d’E. sepositus
À la suite de différentes expériences d’optimisation d’EAM et d’EAU, une méthode
d’extraction robuste a été identifiée et utilisée pour extraire les saponines dans différents
organes (CAE, GON, TEG ORL, TEG ABO et EST) des individus mâles et femelles d’E.
sepositus collectés durant les quatre saisons de l’année (hiver, printemps, été et automne).
Cette approche a pour but d’étudier la variation quantitative des saponines de différents
organes d’E. sepositus en fonction du sexe et de la saison, et de lier cette variation avec le
stade de maturation de l’espèce.
II.4.2. Isolement des caroténoïdes
Pour ce volet de l’étude, il est important de souligner que la fraction B issue de la première
extraction liquide-liquide (entre extrait méthanolique est le n-hexane) est colorée dans le cas
d’E.sepositus en rouge-jaunâtre, et dans le cas d’O.ophidianus en rouge-orangé. Cette
coloration est due probablement à la présence des pigments caroténoïdes dans cette fraction.
De ce fait, cette dernière est utilisée pour isoler les caroténoïdes selon la procédure décrite par
Machmudah et Goto (2013) avec quelques modifications.
Les étapes de récupération des caroténoïdes sont les suivantes:
Après avoir mesuré le volume de la fraction B, cette dernière est filtrée sur papier
filtre Wattman N°42 montée sur un Buchner et reliée à une pompe à vide;
Le filtrat est récupéré et le filtrant a fait objet d’une deuxième extraction avec nhexane, cette extraction consiste à mélanger le filtrant avec un mélange de solvant
acétone/n-hexane (v/v) (le volume de mélange de solvant est égal à 2 fois le volume
de la fraction B initiale) pendant 15 minutes en utilisant un mélangeur antidéflagrant
(de type rotor-stator L2/Air) pour dissoudre le filtrant pâteux dans le solvant;
Une fois le temps d’extraction écoulé, le mélange est filtré une autre fois;
L’opération d’extraction et de filtration sont répétées 3 fois ou plus (3 à 5 fois) jusqu’à
ce que le filtrant devient incolore;
Les filtrats récupérés de chaque extraction sont rassemblés et séchés à l’aide de sulfate
de sodium Na2SO4, puis filtrés pour éliminer les particules de sel en suspension;
Le filtrat récupéré est rota- évaporé à une température ≤ 55 °C, et les résidus obtenus
sont récupérés et stockés dans des flacons opaques.
Extraction des substances actives
100
a. Étude quantitative des saponines d’E. sepositus
À la suite de différentes expériences d’optimisation d’EAM et d’EAU, une méthode
d’extraction robuste a été identifiée et utilisée pour extraire les saponines dans différents
organes (CAE, GON, TEG ORL, TEG ABO et EST) des individus mâles et femelles d’E.
sepositus collectés durant les quatre saisons de l’année (hiver, printemps, été et automne).
Cette approche a pour but d’étudier la variation quantitative des saponines de différents
organes d’E. sepositus en fonction du sexe et de la saison, et de lier cette variation avec le
stade de maturation de l’espèce.
II.4.2. Isolement des caroténoïdes
Pour ce volet de l’étude, il est important de souligner que la fraction B issue de la première
extraction liquide-liquide (entre extrait méthanolique est le n-hexane) est colorée dans le cas
d’E.sepositus en rouge-jaunâtre, et dans le cas d’O.ophidianus en rouge-orangé. Cette
coloration est due probablement à la présence des pigments caroténoïdes dans cette fraction.
De ce fait, cette dernière est utilisée pour isoler les caroténoïdes selon la procédure décrite par
Machmudah et Goto (2013) avec quelques modifications.
Les étapes de récupération des caroténoïdes sont les suivantes:
Après avoir mesuré le volume de la fraction B, cette dernière est filtrée sur papier
filtre Wattman N°42 montée sur un Buchner et reliée à une pompe à vide;
Le filtrat est récupéré et le filtrant a fait objet d’une deuxième extraction avec nhexane, cette extraction consiste à mélanger le filtrant avec un mélange de solvant
acétone/n-hexane (v/v) (le volume de mélange de solvant est égal à 2 fois le volume
de la fraction B initiale) pendant 15 minutes en utilisant un mélangeur antidéflagrant
(de type rotor-stator L2/Air) pour dissoudre le filtrant pâteux dans le solvant;
Une fois le temps d’extraction écoulé, le mélange est filtré une autre fois;
L’opération d’extraction et de filtration sont répétées 3 fois ou plus (3 à 5 fois) jusqu’à
ce que le filtrant devient incolore;
Les filtrats récupérés de chaque extraction sont rassemblés et séchés à l’aide de sulfate
de sodium Na2SO4, puis filtrés pour éliminer les particules de sel en suspension;
Le filtrat récupéré est rota- évaporé à une température ≤ 55 °C, et les résidus obtenus
sont récupérés et stockés dans des flacons opaques.