Matériels et méthodes
Extraction des substances actives
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mer. De ce fait, le rapport gonado-somatique (RGS) est déterminé. Le RGS reflète l’évolution
pondérale des gonades qui caractérise le développement des gonades et le stade de maturité
sexuelle des individus. Cet indice pondéral est calculé mensuellement pour chaque individu
selon la formule suivante:
RGS(%) =
pgo (g)
pt(g)
∗ 100%
(03)
Avec:
pgo: poids des gonades (g);
pt: poids totale de l’individus (g).
Préparation des échantillons
La préparation des échantillons est étape cruciale il doit prendre en considération les
méthodes d’extraction et les molécules d’intérêt. Dans notre étude la lyophilisation est
adoptée.
Avant de procéder à l’extraction les étoiles de mer ainsi que les différents compartiments
anatomiques ont été lyophilisés. Le lyophilisat obtenu est pesé puis stocké dans des tubes
étanches jusqu'à l’utilisation.
Les lyophilisats de corps entiers d’E. sepositus, d’O. ophidianus sont réalisés afin d’extraire
les substances d’intérêts (saponines et caroténoïdes).
Extraction
Dans notre recherche l’extraction est réalisée en deux étapes principales, ces étapes sont
identiques quelle que soit la procédure d’extraction (EAM, EAU, EC):
- Dans un premier temps on procède à l’extraction d’un mélange brut riche en composés
bioactifs. La procédure générale de cette étape consiste à mélanger une quantité de la
poudre lyophilisée (1g) avec un volume équivalent de solvant d’extraction pendant un
certain temps (les valeurs des paramètres expérimentaux diffèrent selon les procédures
d’extraction et l’expérience en cours pour chaque procédure (voir Tab. 6 et Tab. 7
dans la partie II.3.1 Tab 8 pour l’EAM et Tab 9 pour l’EAU dans la partie II.3.2);
Les extraits obtenus sont filtrés à l’aide de papier filtre Wattman N°1 monté sur un
Buchner et relié à une pompe à vide. Les filtrats sont ensuite évaporés pour fournir des
extraits bruts riches en substances actives. L’évaporation de solvant d’extraction est
menée au moyen de rota-évaporateur (du type STUART® ROYAUMES UNIS) à
basse pression dans un bain-marie à 30°C jusqu’à l’évaporation de méthanol.
Les basses pressions permettent d’évaporer le solvant à des faibles températures
évitant ainsi la dégradation des composés thermosensibles;
Extraction des substances actives
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mer. De ce fait, le rapport gonado-somatique (RGS) est déterminé. Le RGS reflète l’évolution
pondérale des gonades qui caractérise le développement des gonades et le stade de maturité
sexuelle des individus. Cet indice pondéral est calculé mensuellement pour chaque individu
selon la formule suivante:
RGS(%) =
pgo (g)
pt(g)
∗ 100%
(03)
Avec:
pgo: poids des gonades (g);
pt: poids totale de l’individus (g).
Préparation des échantillons
La préparation des échantillons est étape cruciale il doit prendre en considération les
méthodes d’extraction et les molécules d’intérêt. Dans notre étude la lyophilisation est
adoptée.
Avant de procéder à l’extraction les étoiles de mer ainsi que les différents compartiments
anatomiques ont été lyophilisés. Le lyophilisat obtenu est pesé puis stocké dans des tubes
étanches jusqu'à l’utilisation.
Les lyophilisats de corps entiers d’E. sepositus, d’O. ophidianus sont réalisés afin d’extraire
les substances d’intérêts (saponines et caroténoïdes).
Extraction
Dans notre recherche l’extraction est réalisée en deux étapes principales, ces étapes sont
identiques quelle que soit la procédure d’extraction (EAM, EAU, EC):
- Dans un premier temps on procède à l’extraction d’un mélange brut riche en composés
bioactifs. La procédure générale de cette étape consiste à mélanger une quantité de la
poudre lyophilisée (1g) avec un volume équivalent de solvant d’extraction pendant un
certain temps (les valeurs des paramètres expérimentaux diffèrent selon les procédures
d’extraction et l’expérience en cours pour chaque procédure (voir Tab. 6 et Tab. 7
dans la partie II.3.1 Tab 8 pour l’EAM et Tab 9 pour l’EAU dans la partie II.3.2);
Les extraits obtenus sont filtrés à l’aide de papier filtre Wattman N°1 monté sur un
Buchner et relié à une pompe à vide. Les filtrats sont ensuite évaporés pour fournir des
extraits bruts riches en substances actives. L’évaporation de solvant d’extraction est
menée au moyen de rota-évaporateur (du type STUART® ROYAUMES UNIS) à
basse pression dans un bain-marie à 30°C jusqu’à l’évaporation de méthanol.
Les basses pressions permettent d’évaporer le solvant à des faibles températures
évitant ainsi la dégradation des composés thermosensibles;