Matériels et méthodes
Étude chimique des saponines d’E. sepositus
112
Les conditions d’ionisation electrospray sont les suivantes: tension de pulvérisation 3-4 kV;
température de capillaire 300 °C; gain de débit de gaz 10-80.
Le spectre global (SM; single-stage SM) est relevé dans la gamme de masse comprise entre
m/z 150 et m/z 2000 afin de détecter tous les ions d’échantillons. L'abondance relative des
ions est calculée en comparant l'intensité du pic de chaque ion avec l’intensité de pic d'ions le
plus intense (fixé à 100%).
Les analyses de la spectrométrie de masse en tandem (SM/SM) induisent la dissociation (CID,
collision-induced dissociation) des ions parents en ions fragments qui seront relevés sur un
spectre CID. Dans notre travail, des analyses (HR-ESI-SM/SM) sont réalisées sur les ions
situés dans la gamme de masse comprise entre m/z 800 et m/z 1000 qui correspondent
probablement à des saponines d’E.sepositus. Ces ions sont soumis à des collisions avec un
gaz cible neutre (Argon) dans une cellule partiellement fermée (T-Wave), la pression à
l’intérieur de cellule est entre 0.9 et 1 mbar et l’énergie de collision utilisé pour obtenir des
ions fragment est située à 32 eV.
L’un des objectifs de cette recherche est la détermination de l’hétérogénéité inter-organe de la
distribution des saponines en fonction du sexe et de la saison. De ce fait, les saponines issues
de différents organes (CAE, GON, TEG ORL, TEG ABO et EST) des deux sexes (mâle et
femelle) et collectées à différentes saisons (hiver, printemps, été et automne) ont été analysées
par spectrométrie de masse. Ce serait ainsi une approche intéressante de point de vue
biologique de déterminer la distribution qualitative des saponines dans les différents organes.
Il est possible qu’une saponine ne soit présente que dans un organe cela permettrait une
meilleure compréhension de l’activité métabolique associée à cette molécule.
IV.2. La Résonance Magnétique Nucléaire RMN
La formule développée et la stéréochimie des composés sont élucidées par l’utilisation des
techniques de résonance magnétique nucléaire (RMN) du proton
1 H et du carbone
13
C à une
dimension (RMN-1D), et à deux dimensions (RMN-2D) homonucléaires:
1 H1
H COSY
(Correlated SpectroscopY);
1 H1 H NOESY(Nuclear Overhauser Effect SpectroscopY);
1 H1
H
ROESY (Rotating frame Overhause Effect SpectroscopY),
1
H1 H TOCSY (Total Correlation
SpectroscopY), et hétéronuclaires:
1 H13 C HSQC (Heteronuclear Single Quantum
Correlation);
1 H13 C HMBC (Heteronuclear Multiple-Bound Correlation).
La résonance magnétique nucléaire est une méthode basée sur les interactions magnétiques
entre les noyaux voisins (magnétisme nucléaire). Elle fournit des spectres dont les pics sont
Étude chimique des saponines d’E. sepositus
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Les conditions d’ionisation electrospray sont les suivantes: tension de pulvérisation 3-4 kV;
température de capillaire 300 °C; gain de débit de gaz 10-80.
Le spectre global (SM; single-stage SM) est relevé dans la gamme de masse comprise entre
m/z 150 et m/z 2000 afin de détecter tous les ions d’échantillons. L'abondance relative des
ions est calculée en comparant l'intensité du pic de chaque ion avec l’intensité de pic d'ions le
plus intense (fixé à 100%).
Les analyses de la spectrométrie de masse en tandem (SM/SM) induisent la dissociation (CID,
collision-induced dissociation) des ions parents en ions fragments qui seront relevés sur un
spectre CID. Dans notre travail, des analyses (HR-ESI-SM/SM) sont réalisées sur les ions
situés dans la gamme de masse comprise entre m/z 800 et m/z 1000 qui correspondent
probablement à des saponines d’E.sepositus. Ces ions sont soumis à des collisions avec un
gaz cible neutre (Argon) dans une cellule partiellement fermée (T-Wave), la pression à
l’intérieur de cellule est entre 0.9 et 1 mbar et l’énergie de collision utilisé pour obtenir des
ions fragment est située à 32 eV.
L’un des objectifs de cette recherche est la détermination de l’hétérogénéité inter-organe de la
distribution des saponines en fonction du sexe et de la saison. De ce fait, les saponines issues
de différents organes (CAE, GON, TEG ORL, TEG ABO et EST) des deux sexes (mâle et
femelle) et collectées à différentes saisons (hiver, printemps, été et automne) ont été analysées
par spectrométrie de masse. Ce serait ainsi une approche intéressante de point de vue
biologique de déterminer la distribution qualitative des saponines dans les différents organes.
Il est possible qu’une saponine ne soit présente que dans un organe cela permettrait une
meilleure compréhension de l’activité métabolique associée à cette molécule.
IV.2. La Résonance Magnétique Nucléaire RMN
La formule développée et la stéréochimie des composés sont élucidées par l’utilisation des
techniques de résonance magnétique nucléaire (RMN) du proton
1 H et du carbone
13
C à une
dimension (RMN-1D), et à deux dimensions (RMN-2D) homonucléaires:
1 H1
H COSY
(Correlated SpectroscopY);
1 H1 H NOESY(Nuclear Overhauser Effect SpectroscopY);
1 H1
H
ROESY (Rotating frame Overhause Effect SpectroscopY),
1
H1 H TOCSY (Total Correlation
SpectroscopY), et hétéronuclaires:
1 H13 C HSQC (Heteronuclear Single Quantum
Correlation);
1 H13 C HMBC (Heteronuclear Multiple-Bound Correlation).
La résonance magnétique nucléaire est une méthode basée sur les interactions magnétiques
entre les noyaux voisins (magnétisme nucléaire). Elle fournit des spectres dont les pics sont