Matériels et méthodes
Étude chimique des saponines d’E. sepositus
111
IV. Identification structurelle des saponines d’Echinaster sepositus
Comme mentionné précédemment dans l’introduction, en amont de cette recherche nous nous
sommes intéressés aux saponines de l’étoile de mer E. sepositus. De ce fait, l’identification
structurelle des saponines est limitée à ceux d’E. sepositus.
Les techniques d’analyse les plus prépondérantes pour l’élucidation structurelle des saponines
sont la spectrométrie de masse et la résonance magnétique nucléaire (RMN), ces deux
techniques sont utilisées dans notre recherche.
IV.1. Spectrométrie de masse
La spectrométrie de masse (en anglais; mass spectrometry ou SM) est une technique utilisée
dans pratiquement tous les domaines pour l’identification, l’analyse structurale, et la
quantification des molécules, et même pour la localisation des molécules au sein d’un tissu
par des techniques d’imagerie.
Les études de Van Dyck et al. (2009, 2010a, 2010b); Demeyer et al. ( 2014) et Grauso et al.
(2019) ont montré que la spectrométrie de masse (SM et SM/SM) est une méthode efficace
pour l’identification des saponines. Elle permet grâce au technique tandem (SM/SM)
d’analyser un mélange de saponines tout en évitant les étapes de purification souvent délicates
(Schoepke et al., 1996).
La spectrométrie de masse est une technique d’analyse basée sur la mesure de la masse d’ions
dérivés d’une analyte en phase gazeuse. Dans le spectromètre de masse, les ions sont produits
à partir de l’analyte dans la source d’ionisation et ils sont séparés selon leur rapport
masse/charge (m/z), puis ils sont détectés par un détecteur relié à un système informatique qui
affiche les signaux en tant que spectre de masse montrant l'abondance relative des signaux en
fonction de leurs rapports masse/charge.
Au cours de cette thèse, les expériences de masse à haute résolution (HR-ESI-SM et HR-ESISM/SM) ont été effectuées sur un spectromètre de masse de type thermo Fisher Scientifique
Q-extractive équipé d’une source d’ionisation Electrospray (ESI +/-) au CRMPO de la
plateforme SCANMAT de l’Université de Rennes 1.
Les saponines sont préparées dans le méthanol à une concentration de 10-20 μg.mL
-1 , et
injectées à un débit constant (5-10μl/min) dans le capillaire conducteur.
Les expériences SM et SM/SM ont été réalisées à la plus haute résolution de l'instrument (140
000 à m/z 200) en mode positive et négative, et la composition élémentaire a été déterminée à
l'aide du logiciel (Xcalibur).
Étude chimique des saponines d’E. sepositus
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IV. Identification structurelle des saponines d’Echinaster sepositus
Comme mentionné précédemment dans l’introduction, en amont de cette recherche nous nous
sommes intéressés aux saponines de l’étoile de mer E. sepositus. De ce fait, l’identification
structurelle des saponines est limitée à ceux d’E. sepositus.
Les techniques d’analyse les plus prépondérantes pour l’élucidation structurelle des saponines
sont la spectrométrie de masse et la résonance magnétique nucléaire (RMN), ces deux
techniques sont utilisées dans notre recherche.
IV.1. Spectrométrie de masse
La spectrométrie de masse (en anglais; mass spectrometry ou SM) est une technique utilisée
dans pratiquement tous les domaines pour l’identification, l’analyse structurale, et la
quantification des molécules, et même pour la localisation des molécules au sein d’un tissu
par des techniques d’imagerie.
Les études de Van Dyck et al. (2009, 2010a, 2010b); Demeyer et al. ( 2014) et Grauso et al.
(2019) ont montré que la spectrométrie de masse (SM et SM/SM) est une méthode efficace
pour l’identification des saponines. Elle permet grâce au technique tandem (SM/SM)
d’analyser un mélange de saponines tout en évitant les étapes de purification souvent délicates
(Schoepke et al., 1996).
La spectrométrie de masse est une technique d’analyse basée sur la mesure de la masse d’ions
dérivés d’une analyte en phase gazeuse. Dans le spectromètre de masse, les ions sont produits
à partir de l’analyte dans la source d’ionisation et ils sont séparés selon leur rapport
masse/charge (m/z), puis ils sont détectés par un détecteur relié à un système informatique qui
affiche les signaux en tant que spectre de masse montrant l'abondance relative des signaux en
fonction de leurs rapports masse/charge.
Au cours de cette thèse, les expériences de masse à haute résolution (HR-ESI-SM et HR-ESISM/SM) ont été effectuées sur un spectromètre de masse de type thermo Fisher Scientifique
Q-extractive équipé d’une source d’ionisation Electrospray (ESI +/-) au CRMPO de la
plateforme SCANMAT de l’Université de Rennes 1.
Les saponines sont préparées dans le méthanol à une concentration de 10-20 μg.mL
-1 , et
injectées à un débit constant (5-10μl/min) dans le capillaire conducteur.
Les expériences SM et SM/SM ont été réalisées à la plus haute résolution de l'instrument (140
000 à m/z 200) en mode positive et négative, et la composition élémentaire a été déterminée à
l'aide du logiciel (Xcalibur).