Matériels et méthodes
Activités biologiques
105
couleur violette, l’intensité de cette couleur est inversement proportionnelle à la capacité des
antioxydants présents dans le milieu réactionnel à donner des protons (Sanchez-Moreno,
2002).
L’effet scavenger des saponines et des caroténoïdes étudiés sur le radical DPPH
est mesuré
en utilisant la méthode de Blanc et al., (2011). Brièvement, une solution de DPPH
d’une
concentration de 1.10
-3 M a été préparée par la solubilisation de 19,7 mg de DPPH
dans 50
ml d’éthanol. Pour 2 mL d’extraits (de différentes concentrations), 150 μl de la solution de
DPPH
ont été ajoutés. Après une incubation de 1h à obscurité, l’absorbance a été mesurée à
517 nm. Le pouvoir antiradicalaire de l’extrait est exprimé en pourcentage d’inhibition (% IP)
du radical DPPH
par la formule suivante:
í µí°¼í µí±ℎí µí±í µí±í µí±í µí±¡í µí±í µí±í µí± í µí°·í µí±í µí±í µí°»(%) =
Abs control − Abs d
′
echqntillon
í µí°´í µí±í µí± í µí±í µí±í µí±í µí±¡í µí±í µí±í µí±
∗ 100 (í µí¿í µí¿)
L'éthanol absolu a été utilisé comme contrôle et la vitamine C, un antioxydant stable, a été
utilisée comme contrôle positif.
La concentration des extraits qui inhibe 50% du DPPH
• (IC50%) est déterminée à partir de la
courbe qui représente les pourcentages d’inhibition en fonction la concentration de l’extrait.
III.1.2. Effet scavenger de l’anion superoxyde O 2
•Dans le présent travail, l’activité anti-oxydante des substances étudiées a été mesurée par des
tests électrochimiques en utilisant le radical libre O2
•- électrogénéré à l’électrode. Cette
méthode a été mise au point récemment à l’ISCR (Institut des Sciences Chimiques de Rennes,
France) par Bourvelec et al. (2008) et appliquée à différents extraits végétaux (René et al.,
2010; Blanc et al., 2011; Brahmi et al., 2015 et Guendouze et al., 2015). C’est la première
fois qu’elle est appliquée à des extraits provenant du monde animal.
a. Principe des tests électrochimiques
Le principe de la méthode électrochimique repose sur la réactivité des molécules présentes
dans l’extrait testé vis-à-vis du radical anion superoxyde O2
•.
Le radical O2
- est électrogénéré à une électrode par la réduction de l’oxygène dissous dans un
milieu aprotique. Dans ces conditions le système redox O2/ O2
•- est un système réversible et
l’ajout des quantités croissantes de l’antioxydant conduit à une perte de réversibilité
(diminution du pic d’oxydation d’O2
•- ).
Activités biologiques
105
couleur violette, l’intensité de cette couleur est inversement proportionnelle à la capacité des
antioxydants présents dans le milieu réactionnel à donner des protons (Sanchez-Moreno,
2002).
L’effet scavenger des saponines et des caroténoïdes étudiés sur le radical DPPH
est mesuré
en utilisant la méthode de Blanc et al., (2011). Brièvement, une solution de DPPH
d’une
concentration de 1.10
-3 M a été préparée par la solubilisation de 19,7 mg de DPPH
dans 50
ml d’éthanol. Pour 2 mL d’extraits (de différentes concentrations), 150 μl de la solution de
DPPH
ont été ajoutés. Après une incubation de 1h à obscurité, l’absorbance a été mesurée à
517 nm. Le pouvoir antiradicalaire de l’extrait est exprimé en pourcentage d’inhibition (% IP)
du radical DPPH
par la formule suivante:
í µí°¼í µí±ℎí µí±í µí±í µí±í µí±¡í µí±í µí±í µí± í µí°·í µí±í µí±í µí°»(%) =
Abs control − Abs d
′
echqntillon
í µí°´í µí±í µí± í µí±í µí±í µí±í µí±¡í µí±í µí±í µí±
∗ 100 (í µí¿í µí¿)
L'éthanol absolu a été utilisé comme contrôle et la vitamine C, un antioxydant stable, a été
utilisée comme contrôle positif.
La concentration des extraits qui inhibe 50% du DPPH
• (IC50%) est déterminée à partir de la
courbe qui représente les pourcentages d’inhibition en fonction la concentration de l’extrait.
III.1.2. Effet scavenger de l’anion superoxyde O 2
•Dans le présent travail, l’activité anti-oxydante des substances étudiées a été mesurée par des
tests électrochimiques en utilisant le radical libre O2
•- électrogénéré à l’électrode. Cette
méthode a été mise au point récemment à l’ISCR (Institut des Sciences Chimiques de Rennes,
France) par Bourvelec et al. (2008) et appliquée à différents extraits végétaux (René et al.,
2010; Blanc et al., 2011; Brahmi et al., 2015 et Guendouze et al., 2015). C’est la première
fois qu’elle est appliquée à des extraits provenant du monde animal.
a. Principe des tests électrochimiques
Le principe de la méthode électrochimique repose sur la réactivité des molécules présentes
dans l’extrait testé vis-à-vis du radical anion superoxyde O2
•.
Le radical O2
- est électrogénéré à une électrode par la réduction de l’oxygène dissous dans un
milieu aprotique. Dans ces conditions le système redox O2/ O2
•- est un système réversible et
l’ajout des quantités croissantes de l’antioxydant conduit à une perte de réversibilité
(diminution du pic d’oxydation d’O2
•- ).