CHAPITRE II : Matériel et méthodes
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Mode opératoire
Le dosage des polyphénols totaux est effectué selon le protocole de Benaribaet al. (2013)
modifié.
Un mélange est conçu avec 0.1 ml d’extrait algal avec 2 ml de Na 2 CO 3 à 2%, après agitation il
est incubé à température ambiante pendant 5 minutes.
Après ajout de 100 l du réactif de Folin à 0.2N, les tubes sont agités et mis en incubation
pendant 30 minutes à température ambiante et à l’abri de la lumière. L’absorbance des
échantillons sont mesurés au spectrophotomètre à 760 nm contre un blanc.
Préparation d’une gamme étalon, dans les mêmes conditions opératoires, en utilisant l’acide
gallique à différentes concentrations (allant de 50 à 1000 g/ml).Après la mesure de
l’absorbance de la gamme étalon, les valeurs serviront au tracé de la courbe d’étalonnage, et à
la détermination de la droite de régression. Qui servira à la déduction de la concentration des
extraits en polyphénols (g équivalent phénol/ mg d’extrait).
Le calcul du taux de polyphénols est fait selon la formule qui suit :
Polyphénols =
a × f
C
Avec :
a : Concentration de polyphénols déterminée à partir de la courbe d’étalonnage.
f : Facteur de dilution (22).
C : Concentration de l’extrait.
II.4.2.3.2. Extraction et analyses biochimiques des polysaccharides
A- Extraction des polysaccharides
Protocole
Une quantité de 15 g de poudre d’algue broyée finement est placée dans 3 cartouches de
cellulose (5g dans chaque cartouche), ces dernières sont mises à l’intérieur de l’extracteur de
Soxhlet (chaque cartouche dans un matra). Une première extraction est réalisée avec de
l’acétone. Ensuite, une deuxième extraction a été réalisée avec de l’éthanol absolu. Des
extraits appauvris en pigments, en lipides et en protéines sont obtenus.
Ces extraits, séchés à l’étuve, sont plongés dans un volume d’eau distillée et subissent une
extraction sous agitation constante. Après une filtration à l’aide de la gaze, les
polysaccharides contenu dans le filtrat sont récupérés par précipitation avec de l’éthanol
absolu sous agitation manuelle vigoureuse. Les polysaccharides ainsi obtenus sont séchés à
l’étuve. Ils sont ensuite broyés finement dans un mortier et conditionnés dans un tube à vice à
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Mode opératoire
Le dosage des polyphénols totaux est effectué selon le protocole de Benaribaet al. (2013)
modifié.
Un mélange est conçu avec 0.1 ml d’extrait algal avec 2 ml de Na 2 CO 3 à 2%, après agitation il
est incubé à température ambiante pendant 5 minutes.
Après ajout de 100 l du réactif de Folin à 0.2N, les tubes sont agités et mis en incubation
pendant 30 minutes à température ambiante et à l’abri de la lumière. L’absorbance des
échantillons sont mesurés au spectrophotomètre à 760 nm contre un blanc.
Préparation d’une gamme étalon, dans les mêmes conditions opératoires, en utilisant l’acide
gallique à différentes concentrations (allant de 50 à 1000 g/ml).Après la mesure de
l’absorbance de la gamme étalon, les valeurs serviront au tracé de la courbe d’étalonnage, et à
la détermination de la droite de régression. Qui servira à la déduction de la concentration des
extraits en polyphénols (g équivalent phénol/ mg d’extrait).
Le calcul du taux de polyphénols est fait selon la formule qui suit :
Polyphénols =
a × f
C
Avec :
a : Concentration de polyphénols déterminée à partir de la courbe d’étalonnage.
f : Facteur de dilution (22).
C : Concentration de l’extrait.
II.4.2.3.2. Extraction et analyses biochimiques des polysaccharides
A- Extraction des polysaccharides
Protocole
Une quantité de 15 g de poudre d’algue broyée finement est placée dans 3 cartouches de
cellulose (5g dans chaque cartouche), ces dernières sont mises à l’intérieur de l’extracteur de
Soxhlet (chaque cartouche dans un matra). Une première extraction est réalisée avec de
l’acétone. Ensuite, une deuxième extraction a été réalisée avec de l’éthanol absolu. Des
extraits appauvris en pigments, en lipides et en protéines sont obtenus.
Ces extraits, séchés à l’étuve, sont plongés dans un volume d’eau distillée et subissent une
extraction sous agitation constante. Après une filtration à l’aide de la gaze, les
polysaccharides contenu dans le filtrat sont récupérés par précipitation avec de l’éthanol
absolu sous agitation manuelle vigoureuse. Les polysaccharides ainsi obtenus sont séchés à
l’étuve. Ils sont ensuite broyés finement dans un mortier et conditionnés dans un tube à vice à