CHAPITRE II : Matériel et méthodes
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II.4.2.2.4. Détermination de la teneur en protéines
 Principe
Le dosage des protéines totales est basé sur la réaction du Biuret qui se traduit par la réduction
des ions Cu2+ en Cu+ par les protéines en milieu alcalin. La liaison peptidique établie entre
deux acides aminés est également capable, dans les mêmes conditions expérimentales, de
former un complexe avec les ions cuivriques Le nombre de liaisons peptidiques, et par
conséquent, la concentration en protéines (C), détermine l’intensité de cette coloration. Ce
complexe peut être dosé par spectrophotométrie à 540 nm.
Cette méthode a été introduite en 1914 par Riegler puis souvent modifiée (Kingsley G.1939),
elle est encore utilisée
actuellement pour doser les protéines totales du sérum par exemple (Tichy et al., 2009).
On réalise une gamme étalon à partir d’un standard de concentration connue ; la mesure de la
concentration protéique de l’échantillon est déterminée par comparaison avec cette gamme
étalon.
 Mode opératoire
 Préparer une solution mère de Sérum albumine bovine (BSA) à 1 %
 Préparer ensuite une gamme en utilisant différentes concentrations de BSA
(0,1- 0,2- 0,3- 0,4- 0,5 g/l) ainsi que l’échantillon.
 Ajouter de l’eau distillée (volume final V f =1ml) et du NAOH dans la gamme
et l’échantillon
 Ajouter dans la gamme et l’échantillon un volume du réactif de Biuret
 Incuber à T° ambiante, de 30 à 90 min, à l’abri de la lumière
 Lecture à 545nm après 35min d’incubation
 Tracer la courbe étalon, DO=f(c).
II.4.2.3. Extraction des biomolécules d’intérêt Eco toxicologique
II.4.2.3.1. Extraction et dosage des composés phénoliques
A- Extraction des composés phénoliques
 Mode opératoire :
L’extraction des composés phénoliques s’est effectuée selon le protocole de Mezdour et
Menad, (2018) et Kuda et al.(2005) modifié.
Extraction dite de type solide-liquide (par macérationà température ambiante et au Soxhlet à
(60°C) de 30 g de l’échantillon broyé (poudre d’algue), pour chaque site, dans un mélange de