CHAPITRE II : Matériel et méthodes
39
2
eme enrichissement et 2ème isolement
A partir du premier enrichissement on procède à un deuxième enrichissement de milieu EPA
en tube (9ml) et à un deuxième réisolement sur la gélose TCBS.
L’identification biochimique
L’identification des vibrions concerne les colonies jaunes, sur le milieu TCBS. Les colonies
typiques ont fait l’objet des tests biochimiques suivants:
La coloration de gram
Elle est réalisée selon le mode cité précédemment, les vibrions sont de petits bacilles incurvés
à Gram négatif
Test oxydase
L'oxydase est une enzyme présente dans certaines chaînes respiratoire cytochromiques
bactériennes (Delarras, 2008).
Le test a été effectué à l’aide des disques oxydases. Le disque est placé sur une lame propre,
Une colonie bien isolée est déposée sur sa surface. Une coloration violette apparaisse après 30
secondes en cas de réaction positive. Le test oxydase des vibrions est positif
II.3.2.3. Identification des germes isolés par galeries biochimiques API20
Les espèces bactériennes une fois isolée ont fait l’objet d’une Identification biochimique
grâce à l’utilisation des galeries d’identification API 20 E, API 20STAPH et API 20 STREP.
Mode opératoire
A partir d’une boite de pétri contenant une culture pure (un seul type de bactérie), une.
Suspension dans de l’eau physiologique a été préparée de densité (0.5 Mac Farland). Avec
cette solution bien homogénéisée, on remplit les galeries en respectant le mode d’emploi. Les
galeries sont incubées à 37°C pendant 24H.
o ·API20E
Galerie de 20 micro-tubes prêts à l’emploi permettant de réaliser 20 tests biochimiques afin
d’identifier des bacilles Gram- appartenant à la famille des Enterobacteriaceae. Néanmoins,
certains bacilles à Gram (-) appartenant à d’autres familles (tels que les vibrions peuvent être
identifiés par API20E).
39
2
eme enrichissement et 2ème isolement
A partir du premier enrichissement on procède à un deuxième enrichissement de milieu EPA
en tube (9ml) et à un deuxième réisolement sur la gélose TCBS.
L’identification biochimique
L’identification des vibrions concerne les colonies jaunes, sur le milieu TCBS. Les colonies
typiques ont fait l’objet des tests biochimiques suivants:
La coloration de gram
Elle est réalisée selon le mode cité précédemment, les vibrions sont de petits bacilles incurvés
à Gram négatif
Test oxydase
L'oxydase est une enzyme présente dans certaines chaînes respiratoire cytochromiques
bactériennes (Delarras, 2008).
Le test a été effectué à l’aide des disques oxydases. Le disque est placé sur une lame propre,
Une colonie bien isolée est déposée sur sa surface. Une coloration violette apparaisse après 30
secondes en cas de réaction positive. Le test oxydase des vibrions est positif
II.3.2.3. Identification des germes isolés par galeries biochimiques API20
Les espèces bactériennes une fois isolée ont fait l’objet d’une Identification biochimique
grâce à l’utilisation des galeries d’identification API 20 E, API 20STAPH et API 20 STREP.
Mode opératoire
A partir d’une boite de pétri contenant une culture pure (un seul type de bactérie), une.
Suspension dans de l’eau physiologique a été préparée de densité (0.5 Mac Farland). Avec
cette solution bien homogénéisée, on remplit les galeries en respectant le mode d’emploi. Les
galeries sont incubées à 37°C pendant 24H.
o ·API20E
Galerie de 20 micro-tubes prêts à l’emploi permettant de réaliser 20 tests biochimiques afin
d’identifier des bacilles Gram- appartenant à la famille des Enterobacteriaceae. Néanmoins,
certains bacilles à Gram (-) appartenant à d’autres familles (tels que les vibrions peuvent être
identifiés par API20E).