CHAPITRE II : Matériel et méthodes
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Le protocole est illustre ci-après :
Figure 13 : Protocole de la coloration de Gram (microbiologie-clinique.com)
Une fois cette étape terminée, le reste des tests s’effectueront uniquement sur les échantillons
testés positifs (bacilles à Gram négatif).
 Test de la catalase
Cette enzyme la décomposition du peroxyde d’hydrogène (H2O2) qui est produit par
certaines réactions cellulaires et est très toxique, donc c’est l’une des enzymes chargée
d’éponger l’eau oxygénée par la dismutation (Pelmont.1993).
La réaction catalysée est la suivante :
H2O2
1/2 O2 + H2O
Le test de la catalase consiste essentiellement à ajouter du peroxyde d’hydrogène (eau
oxygéné) à des colonies bactériennes : la présence de catalase donne lieu à l’apparition de
bulles d’oxygène. Pour les salmonelles, le test catalase doit être négatif.
B- Vibrions
Les vibrions sont présents dans les milieux côtiers et saumâtres, ils sont considérés comme
pathogène pour l’homme et les animaux marins (Sakazaki.1968)
1
er enrichissement
On a procédé à une introduction de 450 ml d’eau de mer à analyser dans un flacon contenant
50 ml de milieu d’enrichissement pour vibrion (Eau Peptonnée Alcaline concentrée 10 fois,
pH 8.6 : EPA). Le mélange est incubé à 37°C pendant 24-48 h.
1
er isolement
On a prélevé à la surface du milieu d'enrichissement une anse bouclée pour ensemencer deux
boites de Pétri de gélose TCBS, l’incubation est réalisée à 37°C pendant 24 h.
Les germes recherchés formeront de petites colonies bombées de couleur jaune.