CHAPITRE II : Matériel et méthodes
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II.3.2.2.1. Dénombrement des coliformes totaux et coliformes thérmotolérants
Aprés filtration comme décrit précédemment, la membrane est déposée sur un milieu gélosé
Sélectif Tergitol-TTC. L’opération est répétée deux fois. L’une des boites est incubée à 37°C
pendant 24h pour la recherche des coliformes totaux, et l’autre est placée à 44°C pour la
recherche des coliformes thérmotolérants.
Les colonies à dénombrer sont celles entourées d’un halo jaune (utilisation du lactose) et
celles colorées en rouge (forte réduction du TTC) (Joffin, 2010).
Le nombre de colonies comptabilisées est exprimé en « Unité Formant Colonie » dans un
volume de 100ml de l’échantillon d’eau analysée (UFC/100ml).
II.3.2.2.2. Dénombrement des streptocoques fécaux
Idem, après filtration, la membrane est disposée sur le milieu Slanetz, gélose glucosée
contenant de l’acide et du TTC, et incubée à 37°C pendant 24-48h. Les colonies de SF seront
de couleur rose ou rouge-marron (test présomptif).
Pour confirmer les résultats, le filtre précédent est reporté sur le milieu BEA (Bile Esculine
Agar), avec une pince stérile, et la boite est incubée à 37 °C pendant 2h (ou plus). Seules les
colonies entourées d’un halo noir sont à dénombrer (Test confirmatif) (Rodier et al.,2009).
Comme les coliformes, le nombre de colonies comptabilisées est exprimé en « Unité Formant
Colonie » dans un volume de 100ml de l’échantillon d’eau analysé (UFC/100ml).
II.3.2.2.3. Recherche (présence/absence) des germes pathogènes
La recherche des Salmonelles et des Vibrions est effectuée par la méthode qualitative, réalisée
en trois étapes successives: Enrichissement, isolement et identification biochimique (Aichiou
L.Echatabi A.2006).
A- Salmonelles
La recherche des salmonelles combine les deux méthodes précédemment mentionnées, celle
de la filtration et la méthode qualitative, réalisée en trois étapes successives :En effectuant
deux séries d’enrichissement et d’isolement, suivies de l’identification biochimique.
Premièrement 100ml d’échantillon d’eau de mer, sont filtrés. Le filtre est ensuite placé dans
un milieu d’enrichissement.
1
er
Enrichissement
Un premier enrichissement est effectué sur bouillon au sélénite de Sodium+Cystéine (SFB),
additionné à de disques SFB. L’incubation est effectuée à 37°C pendant 18h à 24h.
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II.3.2.2.1. Dénombrement des coliformes totaux et coliformes thérmotolérants
Aprés filtration comme décrit précédemment, la membrane est déposée sur un milieu gélosé
Sélectif Tergitol-TTC. L’opération est répétée deux fois. L’une des boites est incubée à 37°C
pendant 24h pour la recherche des coliformes totaux, et l’autre est placée à 44°C pour la
recherche des coliformes thérmotolérants.
Les colonies à dénombrer sont celles entourées d’un halo jaune (utilisation du lactose) et
celles colorées en rouge (forte réduction du TTC) (Joffin, 2010).
Le nombre de colonies comptabilisées est exprimé en « Unité Formant Colonie » dans un
volume de 100ml de l’échantillon d’eau analysée (UFC/100ml).
II.3.2.2.2. Dénombrement des streptocoques fécaux
Idem, après filtration, la membrane est disposée sur le milieu Slanetz, gélose glucosée
contenant de l’acide et du TTC, et incubée à 37°C pendant 24-48h. Les colonies de SF seront
de couleur rose ou rouge-marron (test présomptif).
Pour confirmer les résultats, le filtre précédent est reporté sur le milieu BEA (Bile Esculine
Agar), avec une pince stérile, et la boite est incubée à 37 °C pendant 2h (ou plus). Seules les
colonies entourées d’un halo noir sont à dénombrer (Test confirmatif) (Rodier et al.,2009).
Comme les coliformes, le nombre de colonies comptabilisées est exprimé en « Unité Formant
Colonie » dans un volume de 100ml de l’échantillon d’eau analysé (UFC/100ml).
II.3.2.2.3. Recherche (présence/absence) des germes pathogènes
La recherche des Salmonelles et des Vibrions est effectuée par la méthode qualitative, réalisée
en trois étapes successives: Enrichissement, isolement et identification biochimique (Aichiou
L.Echatabi A.2006).
A- Salmonelles
La recherche des salmonelles combine les deux méthodes précédemment mentionnées, celle
de la filtration et la méthode qualitative, réalisée en trois étapes successives :En effectuant
deux séries d’enrichissement et d’isolement, suivies de l’identification biochimique.
Premièrement 100ml d’échantillon d’eau de mer, sont filtrés. Le filtre est ensuite placé dans
un milieu d’enrichissement.
1
er
Enrichissement
Un premier enrichissement est effectué sur bouillon au sélénite de Sodium+Cystéine (SFB),
additionné à de disques SFB. L’incubation est effectuée à 37°C pendant 18h à 24h.