PROTIDES. PROTÉI‘NES :
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87
d)
: on
a cherché dans le=domaine de
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l_ultracentnfugaüon preparat1ve (separaüon des’rna‘cromoléeules outdes-part1culeS: cetalres) a
amehorer—la resolutwn' des séparations, à" étendre les ,
domames d’ut1hs‘aüon de la méthode-(enaugm‘éntant les champs de»gravita—
t10n réahsables pour pouvoir Séparer'des7moléeules de poids molémairedé‘
plus en plus fa1ble), et enn àaœtoîtrelacacité desrotors.
’
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Dans l’ultracentr1fugatmn préparative elassique diérentiee, chaque frac—
t1on
est _contammee par les part10ules sed1mentant plus lentement ou de plus
petlte tale. La méthode permetcertes ,de;5éparer, dés:partiCulesdecoefcient
de, se_drmentat1on
assez ,d1érent,
plus souvmt…d’ultraéentrifugatrons repetees…
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L’ultraeentnfugaüon _en gradient de densité, consiste,
_à-,remplir
les tubes avec la solutmn contenant,les m‘acromoléaes à séparer, mais à
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deposer ] echa_ut1Hon
sur un grad1ent de…densrte.prealablement reahse dans le
tube,
les dens1tes les plus elevees se trouvant au fond dutube. Deux techniques
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d1‘erentes. sont employees. Dans l’une la ;position'de chaque fraction à la n
de l’operaglpn _ëepend <}e_-1a vitesse de sedzmentatzondechacune l’autrease
fonde sur 1 equzlzb_re
de sedzmentation (ou
Ou macro.
molecules rmgrent
a travers un gradient.dedmsitéet…_stabîüsentgçédansla zone
de même dens1té qu’elle (g. 35). ;
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DISTRIBUTION PAR CONTRE—'COÙRANŸ’: f‘e"é“s‘tiune méthode beaucoup ‘ =' moms
utihsée (g 42)
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la phase, Stationnalre :» S1
Le tube 1_œn51
52
53
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ictier‘1t la substance dissoute (D),,,mdlquée par les hgnes
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Si, avec un volume égal de phase
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…;Î: , «
…
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M2
M1
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5—
5
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séparées. Laïsubstançç çÿsso_uté,sîest_partagée‘
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1
2
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et
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Eiàpe 3 M1
été transférê dansble 1tube
2_ et un
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Eigpç*4zg Lesÿtubes*l“e“t‘2‘ont été ag1tes et’les phases
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51 '. 52 'I/ 53).
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égale—
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mententreM etS
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jE;àÿè 5 M ;a,étê-trasfèrédans
le tube 3_, M2 dans
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Mai—' Mz “
volumefMs‘ a été ajoutéïflas
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sesontseparéesDen0uveauDestd13tf1bué égale
g)METHODBIMMUN OCHIMIQUEee°°Œlsœafæ1p1terdefaÇ0nspœque
laprotemealsolerparlanücofps°°ffesP0datPfealablemetpæm
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