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BIOCHIMIE GÉNÉRALE. LES CONSTITUANTS
a 128 résidus, la chaîne oc de l’hémoglobine humaine 141, la sérum—albumine 560)“,
on scinde la chaîne en plusieurs fragments par hydrolyse acide partielle (HCl;à
‘
37 °C pendant plusieurs jours) ou par hydrolyse enzymatique.
.
Endopeptidases. —- La trypsine a une action spécique, elle rompt les liaisons
où lysine et arginine sont engagées par leurs carboxyles; la chymotrypsine est
”
moins spécique et scinde au niveau du carboxyle du tryptophane, de la .
tyrosine et de la phénylalanine essentiellement. La pepsine a une spécicité
d’action encore moins étroite; elle exerce son action surtout sur les liaisons
des groupes aminés et carboxyliques des acides aminés aromatiques.
Exopeptidases. —— Les carboxypeptidases attaquent par l’extrémité C termi—
nale. La leucine—amino-peptidase est plus employée, elle attaque par l’extrémité
.
'
aminée. Les hydrolyses enzymatiques n’entraînent
0
ni destruction, ni racémisation, n’agissent que sur les
O
00
ac1des ammés L et respectent les groupes am1des
'
O
de ASN et GLN.
.
.
0
_
PIG. 22._— Electrophorese_(honzontale)
et chromato0 O 0 0
graphie (verticale) sur paprerd un hydrolysat tryp51que
de protéine. Chaque tache obtenue par réaction à la
_
__
î
_
+
ninhydiine repréSente un peptide. L’ensemble réalise -'
_
-
'
"
le « nger—print » de la protéine étud1ée.
Agents chimiques. —' Des ruptures spéciques peuvent être obtenues, par
exemple au niveau d’une liaison peptidique faisant intervenir la méthionine, par
le bromure de cyànogène.
On sépare les fragments soit par électrophorése dans une dimension et
'
chr0matographie dans
seconde [la coloration se fait à l’aide d’une réaction
_
à la ninhydrine, on obtient dans ce cas une disposition caractéristique de taches
peptidiques ou « ngerprint » ou empreintes digitales], soit par chromatographie
_
élue à l’aide de solvants volatils faciles à évaporer, de sorte
'
qu’on puisse purier les peptides.
’
On'effectue ensuite l’analyse en acides aminés et on détermine la séquence
des acides aminés des différents peptides isolés et puriés par nouvelle chro-.
.
.
matographie ou“éleétrophorèse.
'
"
'
‘
_
,
Si l’on connaît la place exacte dans une longue chaîne polypeptidiqùe, par
Ÿ
exemple, de Leu—Ala et qu’on isole un peptide Leu—Ala—Tyr,_ on connaît
automatiquement la position exacte de Tyr qui est commandée par la place
»
'
occupée par les deux acides aminés qui la précèdent— et on pourra reconstituer
la totalité de la séquence ”comme on fait pour un << puzzle >>.
.
Spectrographie de masse. —‘ On a préparé des dériVés peptidiques volatlls
'
'
(esters méthyliques‘ des acylpéptides par exemple) ,etion les ionise dans un
spectromètre de
Les ions ainsi.obtenus Sont acçélérés dans un champ
é1eÿt__qué
et séparés selon leur maSsè. celle—ci
mësurée avecuné grande
:
prec1smn,
_
.
_'
_
f —
.
_
_
-ç.:;- Ï .
.,Autê2matisation de
l
…
P…CIPAUXPEPTESNATUREŒ
.
,
euxfllPePülde‘—îsontmmwrtantsoralestmuvedansles muscleslacamo
smeetlammeIlsdenventtwsdeuxde1mstldmeetdeia@aiamneie
Pfemæf°s”aBalanY1hlsüdmelesecwdlaBalanyllmethylhlsudme
:
“
' ? al“fesS©td<’«Sfacteursdecrmssmceaoldeparaammebenzcnqueaude
BIOCHIMIE GÉNÉRALE. LES CONSTITUANTS
a 128 résidus, la chaîne oc de l’hémoglobine humaine 141, la sérum—albumine 560)“,
on scinde la chaîne en plusieurs fragments par hydrolyse acide partielle (HCl;à
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Endopeptidases. —- La trypsine a une action spécique, elle rompt les liaisons
où lysine et arginine sont engagées par leurs carboxyles; la chymotrypsine est
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d’action encore moins étroite; elle exerce son action surtout sur les liaisons
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Les ions ainsi.obtenus Sont acçélérés dans un champ
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