5.1 Quelques outils de base
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© Dunod – La photocopie non autorisée est un délit.
Figure 45 Insertion d’un fragment d’ADN
dans un plasmide.
Le fragment double brin, ou insert, sera inséré dans un site
de restriction unique, ou « polylinker ». Il est nécessaire après
l’action de l’enzyme de restriction et avant celle de la ligase
de déphosphorylé les extrémités 5’ du plasmide linéarisé afin
d’empêcher qu’il redevienne à nouveau circulaire. Le phosphore nécessaire à sa nouvelle ligation (ce mot est un des
nombreux anglicismes passé dans le langage courant et signifie ligature) sera fourni par l’insert ou par le gène qui confère
au plasmide sa résistance aux antibiotiques dans le cas où
l’on veut introduire ce gène.