5.1 Quelques outils de base
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© Dunod – La photocopie non autorisée est un délit.
tologique des séquences extraites de cellules. L’un des problèmes
majeurs de cette technique est l’étalonnage, c’est-à-dire de connaître le
nombre de cycles d’amplification. On utilise pour cela des témoins,
soit ADN endogène connu, soit séquence analogue à celle qui est étudiée, mais de poids moléculaire légèrement différent, ou sur laquelle
on a pu créer par mutagenèse un nouveau site de restriction (fig. 28).
De nouvelles techniques permettent de s’affranchir de cette contrainte
(« Real-Time PCR »).
Figure 43 Principe d’une PCR.
La « Polymerase Chain Reaction » est une amplification artificielle in vitro à partir d’amorces. La structure des amorces
délimite la longueur de la séquence qui sera amplifiée. La
multiplication des cycles permet d’amplifier des quantités
infimes d’ADN jusqu’à ce qu’elles deviennent visibles en UV
en électrophorèse.