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5 • Techniques et biotechnologies
(voir fig. 19) pour amplifier des séquences et doser de tout petits fragments d’ADN.
Connaissant la séquence nucléotidique d’un gène on peut faire fabriquer artificiellement des oligonucléotides spécifiques de la séquence.
Ces amorces pourront servir de point de départ à la synthèse d’une
copie du gène grâce à un enzyme l’ADN polymérase aussi appelée Taq
(de Thermus aquaticus, le microorganisme dont elle est extraite) polymérase. Cette ADN polymérase ressemble à la polymérase physiologique qui est responsable de la duplication de l’ADN, mais elle est de plus
thermostable, ce qui lui confère un avantage pratique.
La PCR est une technique qui permet d’amplifier des séquences
d’ADN presque à l’infini et qui est basée sur le principe de la réplication. Comme pour la réplication, il y a action d’une ADN polymérase
qui duplique la séquence à partir d’amorces, il faut ensuite artificiellement, par la chaleur, séparer les deux brins d’ADN (alors qu’au cours
de la réplication cette opération se fait sous l’action d’une hélicase).
La réaction (fig. 43 et 44) se produit dans un petit appareil (peu coûteux) qui est capable de changer vite de température et de passer de
95°, température qui dissocie l’ADN, à 55 °C, température qui permet aux amorces de s’hybrider et enfin à 72 °C, température qui permet à la polymérase d’avoir son action optima. Les amorces sont des
copies homologues des extrémités de la séquence à copier, l’une est
5’-3’, s’hybride à l’extrémité 3’ du brin non-codant et permettra la
synthèse de novo, avec des substrats radioactifs, du brin codant,
l’autre est 3’-5’.
La PCR est utilisée pour amplifier des séquences ADN peu abondantes, ou, après réverse transcription, des séquences ARN (RT-PCR).
La séquence nucléotidique située entre les amorces sera entièrement
amplifiée, les deux amorces indiquant de chaque côté (fig. 43) les limites du processus. On peut ainsi amplifier une séquence dont on ne
connaît que les extrémités, alors que l’on ignore la structure de la portion médiane, cette possibilité est à la base du développement de l’analyse des microsatellites en génétique, on en parlera plus loin. La
puissance de cet outil est telle qu’elle permet d’amplifier sur coupe his-
5 • Techniques et biotechnologies
(voir fig. 19) pour amplifier des séquences et doser de tout petits fragments d’ADN.
Connaissant la séquence nucléotidique d’un gène on peut faire fabriquer artificiellement des oligonucléotides spécifiques de la séquence.
Ces amorces pourront servir de point de départ à la synthèse d’une
copie du gène grâce à un enzyme l’ADN polymérase aussi appelée Taq
(de Thermus aquaticus, le microorganisme dont elle est extraite) polymérase. Cette ADN polymérase ressemble à la polymérase physiologique qui est responsable de la duplication de l’ADN, mais elle est de plus
thermostable, ce qui lui confère un avantage pratique.
La PCR est une technique qui permet d’amplifier des séquences
d’ADN presque à l’infini et qui est basée sur le principe de la réplication. Comme pour la réplication, il y a action d’une ADN polymérase
qui duplique la séquence à partir d’amorces, il faut ensuite artificiellement, par la chaleur, séparer les deux brins d’ADN (alors qu’au cours
de la réplication cette opération se fait sous l’action d’une hélicase).
La réaction (fig. 43 et 44) se produit dans un petit appareil (peu coûteux) qui est capable de changer vite de température et de passer de
95°, température qui dissocie l’ADN, à 55 °C, température qui permet aux amorces de s’hybrider et enfin à 72 °C, température qui permet à la polymérase d’avoir son action optima. Les amorces sont des
copies homologues des extrémités de la séquence à copier, l’une est
5’-3’, s’hybride à l’extrémité 3’ du brin non-codant et permettra la
synthèse de novo, avec des substrats radioactifs, du brin codant,
l’autre est 3’-5’.
La PCR est utilisée pour amplifier des séquences ADN peu abondantes, ou, après réverse transcription, des séquences ARN (RT-PCR).
La séquence nucléotidique située entre les amorces sera entièrement
amplifiée, les deux amorces indiquant de chaque côté (fig. 43) les limites du processus. On peut ainsi amplifier une séquence dont on ne
connaît que les extrémités, alors que l’on ignore la structure de la portion médiane, cette possibilité est à la base du développement de l’analyse des microsatellites en génétique, on en parlera plus loin. La
puissance de cet outil est telle qu’elle permet d’amplifier sur coupe his-