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5 • Techniques et biotechnologies
logues. La liaison hydrogène à l’origine de cette hybridation n’est stable
que dans certaines conditions particulières de température et de force
ionique que l’on appelle conditions de stringence, elles sont spécifiques
pour un hybride donné. À l’inverse, à forte température les deux brins
d’une molécule d’ADN se séparent, là aussi dans des conditions de
température et de force ionique précises et spécifiques.
b) Enzymes de restriction
Les enzymes de restriction sont des endonucléases capables de couper
des séquences nucléotidiques à des emplacements reproductibles et
définis de façon spécifique en termes de bases. Cette définition n’est
pas rigoureusement vraie puisqu’il existe des enzymes de restriction
capables de couper des séquences partiellement définies (la Nsp II
figure 39). Les plus utilisés des enzymes de restriction font des coupures sur des séquences dites palindromiques 1 , ce qui veut dire que la
séquence est identique sur les deux brins lorsqu’elle est lue de 5’ en 3’
dans les deux cas (EcoR I). Après ce type de coupure les extrémités de
la séquence se chevauchent (« sticky ends »). Il y a des enzymes qui font
des coupures franches, ils sont particulièrement utiles lorsque l’on veut
par exemple re-souder les bords d’un plasmide (Alu I). Ces coupures
sont si spécifiques et si reproductibles qu’elles permettent de définir
une séquence, il est courant et habituel de définir une séquence
nucléotidique, un gène par exemple, au moyen d’une carte de restriction (schématisée figure 39) sur laquelle on figure les sites dits de restriction, qui indiquent des éléments partiels de la séquence.
Le principe des cartes de restriction est double : (i) il faut d’abord
fragmenter l’ADN, qui est une énorme molécule, et il faut que cette
fragmentation se fasse à des endroits reproductibles, ce sera le fait des
enzymes de restriction. (ii) Il faut ensuite savoir où l’on est, on ne peut
pas mesurer la distance séparant le locus d’intérêt du début de la
1. Un exemple de palindrome : Esope reste ici et se repose, qui peut se lire dans les
deux sens.
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logues. La liaison hydrogène à l’origine de cette hybridation n’est stable
que dans certaines conditions particulières de température et de force
ionique que l’on appelle conditions de stringence, elles sont spécifiques
pour un hybride donné. À l’inverse, à forte température les deux brins
d’une molécule d’ADN se séparent, là aussi dans des conditions de
température et de force ionique précises et spécifiques.
b) Enzymes de restriction
Les enzymes de restriction sont des endonucléases capables de couper
des séquences nucléotidiques à des emplacements reproductibles et
définis de façon spécifique en termes de bases. Cette définition n’est
pas rigoureusement vraie puisqu’il existe des enzymes de restriction
capables de couper des séquences partiellement définies (la Nsp II
figure 39). Les plus utilisés des enzymes de restriction font des coupures sur des séquences dites palindromiques 1 , ce qui veut dire que la
séquence est identique sur les deux brins lorsqu’elle est lue de 5’ en 3’
dans les deux cas (EcoR I). Après ce type de coupure les extrémités de
la séquence se chevauchent (« sticky ends »). Il y a des enzymes qui font
des coupures franches, ils sont particulièrement utiles lorsque l’on veut
par exemple re-souder les bords d’un plasmide (Alu I). Ces coupures
sont si spécifiques et si reproductibles qu’elles permettent de définir
une séquence, il est courant et habituel de définir une séquence
nucléotidique, un gène par exemple, au moyen d’une carte de restriction (schématisée figure 39) sur laquelle on figure les sites dits de restriction, qui indiquent des éléments partiels de la séquence.
Le principe des cartes de restriction est double : (i) il faut d’abord
fragmenter l’ADN, qui est une énorme molécule, et il faut que cette
fragmentation se fasse à des endroits reproductibles, ce sera le fait des
enzymes de restriction. (ii) Il faut ensuite savoir où l’on est, on ne peut
pas mesurer la distance séparant le locus d’intérêt du début de la
1. Un exemple de palindrome : Esope reste ici et se repose, qui peut se lire dans les
deux sens.