128
53 Cinétiqueenzymatique :
mesure desvitessesinitiales
Mots clés
Vitesse initiale, concentration d’enzyme, concentration de substrat, courbe v = f[S]
1. GÉNÉRALITÉS
L’étude de la cinétique d’une enzyme consiste dans un premier temps à mesurer l’influence
de la concentration du substrat – ou des substrats – sur la vitesse de formation du produit
- ou des produits. Vient ensuite la phase d’interprétation de ces mesures qui conduit aux
paramètres de vitesse maximum et d’affinité pour les substrats (Fiches 54-56).
Pour étudier la cinétique d’une enzyme, il est préférable de disposer de l’enzyme pure
afin d’éviter toute interférence d’une réaction parasite dans le déroulement de la réaction. Il faut également s’assurer de la stabilité de l’enzyme dans les conditions d’étude :
pH, température, composition du milieu d’incubation.
L’interprétation des résultats expérimentaux suppose que la concentration d’enzyme est
beaucoup plus faible que la plus petite concentration de substrat utilisée (voir dans la
Fiche 53 l’établissement de l’équation de Michaelis-Menten). Cette condition est généralement respectée lors des études cinétiques, car les concentrations d’enzyme sont de
l’ordre de 10 –8 à 10 –9 mol L –1 , alors que les concentrations de substrats se situent autour
de 10 –6 – 10 –2 mol L –1 .
2. NOTION DE « VITESSE INITIALE »
Dès que l’on met l’enzyme en contact avec une solution contenant le substrat, on observe
la formation du produit en fonction du temps (courbe ci-contre). En toute rigueur on
devrait mesurer la tangente de cette courbe à l’origine. En pratique, on considère que la
courbe présente une partie rectiligne et l’on mesure l’augmentation de la concentration
de produit D[P] pendant un intervalle de temps Dt. On estime que les résultats restent
acceptables tant que la concentration de produit reste inférieure à 10 % de la concentration initiale de substrat.
[Produit]
Temps
[P] d[P]
≈
t
dt
D
D
9782100724185-Livre.indb 128
20/05/15 19:11
53 Cinétiqueenzymatique :
mesure desvitessesinitiales
Mots clés
Vitesse initiale, concentration d’enzyme, concentration de substrat, courbe v = f[S]
1. GÉNÉRALITÉS
L’étude de la cinétique d’une enzyme consiste dans un premier temps à mesurer l’influence
de la concentration du substrat – ou des substrats – sur la vitesse de formation du produit
- ou des produits. Vient ensuite la phase d’interprétation de ces mesures qui conduit aux
paramètres de vitesse maximum et d’affinité pour les substrats (Fiches 54-56).
Pour étudier la cinétique d’une enzyme, il est préférable de disposer de l’enzyme pure
afin d’éviter toute interférence d’une réaction parasite dans le déroulement de la réaction. Il faut également s’assurer de la stabilité de l’enzyme dans les conditions d’étude :
pH, température, composition du milieu d’incubation.
L’interprétation des résultats expérimentaux suppose que la concentration d’enzyme est
beaucoup plus faible que la plus petite concentration de substrat utilisée (voir dans la
Fiche 53 l’établissement de l’équation de Michaelis-Menten). Cette condition est généralement respectée lors des études cinétiques, car les concentrations d’enzyme sont de
l’ordre de 10 –8 à 10 –9 mol L –1 , alors que les concentrations de substrats se situent autour
de 10 –6 – 10 –2 mol L –1 .
2. NOTION DE « VITESSE INITIALE »
Dès que l’on met l’enzyme en contact avec une solution contenant le substrat, on observe
la formation du produit en fonction du temps (courbe ci-contre). En toute rigueur on
devrait mesurer la tangente de cette courbe à l’origine. En pratique, on considère que la
courbe présente une partie rectiligne et l’on mesure l’augmentation de la concentration
de produit D[P] pendant un intervalle de temps Dt. On estime que les résultats restent
acceptables tant que la concentration de produit reste inférieure à 10 % de la concentration initiale de substrat.
[Produit]
Temps
[P] d[P]
≈
t
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