Fiche 47 • Précipitation fractionnée et dialyse
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3. DIALYSE
Cette technique consiste à séparer les protéines des petites molécules (sulfate d’ammonium par exemple), sur la base de leur taille et de deur différence de concentration de
part et d’autre d’une membrane semi-perméable de type cellulose, pourvue de pores
calibrés ; habituellement, les membranes se présentent sous forme de boyaux de cellulose
dont les pores laissent diffuser les molécules dont la masse moléculaire est inférieure à
8 000 Da. La solution est introduite dans un boyau fermé à ses deux extrémités au moyen
de pinces (figure ci-dessous) ; l’ensemble est alors immergé dans un grand volume d’eau
distillée (ou un tampon approprié - composition et pH compatibles avec la stabilité de
l’enzyme ou de la protéine étudiées).
Les petites molécules et les ions vont diffuser à l’extérieur du sac de dialyse jusqu’à
équilibre. La solution extérieure est appelée dialysat et le contenu du sac rétentat. Le
dialysat est éliminé et le sac placé à nouveau dans la même solution exempte des petites
molécules. Cette opération sera répétée ainsi jusqu’à élimination complète des petites
molécules dans le rétentat.
Début
Équilibre
Dialyse. Au cours de la dialyse, les petites molécules (disques gris) diffusent librement
au travers d’une membrane semiperméable jusqu’à un équilibre. Les protéines (disques roses)
restent bloquées dans le sac de dialyse.
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