110
47 Précipitationfractionnée
et dialyse
Mots clés
Sulfate d’ammonium ; membrane semi-perméable ; diffusion passive
1. OBJECTIF
Décrire la première étape généralement abordée lors de la purification d’une protéine
ainsi que l’étape qui lui fait suite, nécessaire à la poursuite de la purification.
2. PRÉCIPITATION FRACTIONNÉE AU SULFATE D’AMMONIUM
Généralement, cette technique est utilisée dans les premières étapes de la purification
des protéines. En effet, elle est peu coûteuse et possède une capacité de fractionnement
différentiel élevée. La précipitation des protéines par le sulfate d’ammonium est un cas
particulier du phénomène de « salting out » (Fiche 44).
Formule du sulfate d’ammonium.
L’utilisation de ce sel est particulièrement intéressante pour plusieurs raisons :
• Le sulfate d’ammonium présente une très forte solubilité dans l’eau (744 g L –1 à 20 °C).
• Le sulfate d’ammonium est constitué de deux ions (SO 4
2– et NH 4
+ ) classés, selon les
séries de Hofmeister ou séries lyotropes, comme possédant une forte capacité de précipitation (salting out).
Capacité à la précipitation
(salting out)
PO 4
3– > SO 4
2– > COO – > Cl – > Br – > NO 3
– > ClO 4
–
NH 4
+ > Rb + > K + > Na + > Cs + > Li + > Mg 2+ > Ca 2+
• En règle générale, le sulfate d’ammonium n’a pas d’effets négatifs sur l’activité des
enzymes.
La procédure de purification consiste à soumettre l’extrait protéique à des concentrations croissantes en sulfate d’ammonium, à récupérer le précipité par centrifugation et
à repérer la protéine d’intérêt par une technique appropriée (Fiche 46). La mise en évidence de la protéine d’intérêt nécessite d’éliminer préalablement le sulfate d’ammonium.
La dialyse permet cette opération.
9782100724185-Livre.indb 110
20/05/15 19:11
47 Précipitationfractionnée
et dialyse
Mots clés
Sulfate d’ammonium ; membrane semi-perméable ; diffusion passive
1. OBJECTIF
Décrire la première étape généralement abordée lors de la purification d’une protéine
ainsi que l’étape qui lui fait suite, nécessaire à la poursuite de la purification.
2. PRÉCIPITATION FRACTIONNÉE AU SULFATE D’AMMONIUM
Généralement, cette technique est utilisée dans les premières étapes de la purification
des protéines. En effet, elle est peu coûteuse et possède une capacité de fractionnement
différentiel élevée. La précipitation des protéines par le sulfate d’ammonium est un cas
particulier du phénomène de « salting out » (Fiche 44).
Formule du sulfate d’ammonium.
L’utilisation de ce sel est particulièrement intéressante pour plusieurs raisons :
• Le sulfate d’ammonium présente une très forte solubilité dans l’eau (744 g L –1 à 20 °C).
• Le sulfate d’ammonium est constitué de deux ions (SO 4
2– et NH 4
+ ) classés, selon les
séries de Hofmeister ou séries lyotropes, comme possédant une forte capacité de précipitation (salting out).
Capacité à la précipitation
(salting out)
PO 4
3– > SO 4
2– > COO – > Cl – > Br – > NO 3
– > ClO 4
–
NH 4
+ > Rb + > K + > Na + > Cs + > Li + > Mg 2+ > Ca 2+
• En règle générale, le sulfate d’ammonium n’a pas d’effets négatifs sur l’activité des
enzymes.
La procédure de purification consiste à soumettre l’extrait protéique à des concentrations croissantes en sulfate d’ammonium, à récupérer le précipité par centrifugation et
à repérer la protéine d’intérêt par une technique appropriée (Fiche 46). La mise en évidence de la protéine d’intérêt nécessite d’éliminer préalablement le sulfate d’ammonium.
La dialyse permet cette opération.
9782100724185-Livre.indb 110
20/05/15 19:11