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B IOLOGIE CELLULAIRE
ments obtenus ne sont pas parfaitement purs
d’emblée car ils sont toujours contaminés par des
éléments appartenant au surnageant ;on doit donc
«laver » les culots, soit en les resuspendant dans
un milieu neuf et en les recentrifugeant plusieurs
fois, soit en les soumettant à un gradient de saccharose qui donne, en une seule étape, des fractions d’une grande pureté (voir plus haut).
HOMOGÉNÉISATION
1) fragment de tissu
2) broyage mécanique au "mixer"
3) homogénat
tissulaire
noyaux
mitochondries,
lysosomes...
microsomes
ribosomes
1
23
123
4
Centrifugations successives
1) basse vitesse 2) vitesse moyenne 3) vitesse élevée 4) vitesse élevée, longue durée
10 min
1000 x g
15 min
10 000 x g
1 h
100 000 x g
10 h
100 000 x g
le culot
contient
les ribosomes
homogénat
tissulaire
centrifugé
le culot
contient
les noyaux
le culot
contient
les mitochondries,
les lysosomes...
le culot
contient
les microsomes
Figure 3.10
Protocole de fractionnement cellulaire par centrifugation différentielle
L’homogénat initial obtenu à partir d’un fragment de tissu (1 à 3) est fractionné, par 4 centrifugations de plus en plus
fortes, en une série de 4 sédiments contenant des organites ou des particules de masse de plus en plus faible, et un surnageant final à partir duquel plus rien ne peut être sédimenté. Les microsomes (culot 3) sont de petites vésicules provenant de la fragmentation de certains systèmes membranaires de la cellule au cours de l’homogénéisation.
B IOLOGIE CELLULAIRE
ments obtenus ne sont pas parfaitement purs
d’emblée car ils sont toujours contaminés par des
éléments appartenant au surnageant ;on doit donc
«laver » les culots, soit en les resuspendant dans
un milieu neuf et en les recentrifugeant plusieurs
fois, soit en les soumettant à un gradient de saccharose qui donne, en une seule étape, des fractions d’une grande pureté (voir plus haut).
HOMOGÉNÉISATION
1) fragment de tissu
2) broyage mécanique au "mixer"
3) homogénat
tissulaire
noyaux
mitochondries,
lysosomes...
microsomes
ribosomes
1
23
123
4
Centrifugations successives
1) basse vitesse 2) vitesse moyenne 3) vitesse élevée 4) vitesse élevée, longue durée
10 min
1000 x g
15 min
10 000 x g
1 h
100 000 x g
10 h
100 000 x g
le culot
contient
les ribosomes
homogénat
tissulaire
centrifugé
le culot
contient
les noyaux
le culot
contient
les mitochondries,
les lysosomes...
le culot
contient
les microsomes
Figure 3.10
Protocole de fractionnement cellulaire par centrifugation différentielle
L’homogénat initial obtenu à partir d’un fragment de tissu (1 à 3) est fractionné, par 4 centrifugations de plus en plus
fortes, en une série de 4 sédiments contenant des organites ou des particules de masse de plus en plus faible, et un surnageant final à partir duquel plus rien ne peut être sédimenté. Les microsomes (culot 3) sont de petites vésicules provenant de la fragmentation de certains systèmes membranaires de la cellule au cours de l’homogénéisation.