48
Partie 1 • Méthodes séparatives
notées ici R (composé)/R(phase stat.) et S (composé)/R (phase stat.) dont les stabilités sont
légèrement différentes. Les aires sont proportionnelles à l’abondance de chacune des deux
formes R et S.
Actuellement on utilise principalement des résines optiquement actives ou des gels de
silice greffés avec des cyclodextrines (enchaînements cycliques de 5 à 7 molécules de glucose) par l’intermédiaire d’un « bras » ayant plusieurs atomes de carbone (fig. 2.14). Ces
molécules de forme cylindrique présentent une cavité hydrophobe tandis que la paroi externe est hydrophile. Ces phases ont la particularité de permettre l’inclusion sélective d’une
grande variété de composés qui conduisent en surface à des complexes diastéréoisomères
réversibles.
On appelle pureté optique de l’analyte, son excès énantiomérique (e.e), calculé à partir
de la relation suivante où S R et S S désignent les aires des pics des deux énantiomères :
Pureté optique (e.e. %) = 100
|S R − S S |
S R + S S
β-cyclodextrine
O
O
O
O
O
O
O
O
O
O
O
OH
HO
HO
HO
HO
HO
HO
HO
HO
HO
HO
HO
HO
OH
OH
OH
O
OH
O
OH
OH
OH
OH
O
particule de silice
CH OH
2
CH OH
2
CH OH
2
O
O
O
O
O
OH
HO
OH
OH
OH
OH
OH
OH
OH
OH
OH
OH
OH
OH
OH
CH OH
2
CH OH
2
CH OH
2
O
O
O
O
O
OH
HO
OH
OH
OH
OH
OH
OH
OH
OH
OH
OH
OH
OH OH
CH OH
2
CH OH
2
CH OH
2
O
O
O
O
O
OH
HO
OH
OH
OH
OH
OH
OH
OH
OH
OH
OH
OH
OH OH
CH OH
2
CH OH
2
CH OH
2
O
O
O
O
O
OH
HO
OH
OH
OH
OH
OH
OH
OH
OH
OH
OH
OH
OH OH
séparation d'un racémique
D,L- tryptophane
14
20 min
16
18
D
L
H
N
C C
NH 2
CO 2 H
H
H
H
*
7111
Cyclobond III
Figure 2.14 Séparation d’un racémate sur phase stationnaire chirale.
Chromatogramme d’un composé à l’état de mélange 50/50 des deux formes R et S
(adapté d’un document Alltech) ; formule développée de la b-cyclodextrine et aspect
dans l’espace (diamètre 1,5 nm, trou 0,8 nm, hauteur 0,8 nm) ; représentation partielle
d’une sphère de gel de silice greffée avec une cyclodextrine par l’intermédiaire d’un bras
extenseur.
2.8 PHASES MOBILES
Suivant un principe général, à une phase stationnaire polaire on oppose une phase mobile
peu ou pas polaire et vice-versa. La chromatographie est dite en phase normale dans le
premier cas et à polarité de phase inversée (« R − HPLC »). dans le second.
Partie 1 • Méthodes séparatives
notées ici R (composé)/R(phase stat.) et S (composé)/R (phase stat.) dont les stabilités sont
légèrement différentes. Les aires sont proportionnelles à l’abondance de chacune des deux
formes R et S.
Actuellement on utilise principalement des résines optiquement actives ou des gels de
silice greffés avec des cyclodextrines (enchaînements cycliques de 5 à 7 molécules de glucose) par l’intermédiaire d’un « bras » ayant plusieurs atomes de carbone (fig. 2.14). Ces
molécules de forme cylindrique présentent une cavité hydrophobe tandis que la paroi externe est hydrophile. Ces phases ont la particularité de permettre l’inclusion sélective d’une
grande variété de composés qui conduisent en surface à des complexes diastéréoisomères
réversibles.
On appelle pureté optique de l’analyte, son excès énantiomérique (e.e), calculé à partir
de la relation suivante où S R et S S désignent les aires des pics des deux énantiomères :
Pureté optique (e.e. %) = 100
|S R − S S |
S R + S S
β-cyclodextrine
O
O
O
O
O
O
O
O
O
O
O
OH
HO
HO
HO
HO
HO
HO
HO
HO
HO
HO
HO
HO
OH
OH
OH
O
OH
O
OH
OH
OH
OH
O
particule de silice
CH OH
2
CH OH
2
CH OH
2
O
O
O
O
O
OH
HO
OH
OH
OH
OH
OH
OH
OH
OH
OH
OH
OH
OH
OH
CH OH
2
CH OH
2
CH OH
2
O
O
O
O
O
OH
HO
OH
OH
OH
OH
OH
OH
OH
OH
OH
OH
OH
OH OH
CH OH
2
CH OH
2
CH OH
2
O
O
O
O
O
OH
HO
OH
OH
OH
OH
OH
OH
OH
OH
OH
OH
OH
OH OH
CH OH
2
CH OH
2
CH OH
2
O
O
O
O
O
OH
HO
OH
OH
OH
OH
OH
OH
OH
OH
OH
OH
OH
OH OH
séparation d'un racémique
D,L- tryptophane
14
20 min
16
18
D
L
H
N
C C
NH 2
CO 2 H
H
H
H
*
7111
Cyclobond III
Figure 2.14 Séparation d’un racémate sur phase stationnaire chirale.
Chromatogramme d’un composé à l’état de mélange 50/50 des deux formes R et S
(adapté d’un document Alltech) ; formule développée de la b-cyclodextrine et aspect
dans l’espace (diamètre 1,5 nm, trou 0,8 nm, hauteur 0,8 nm) ; représentation partielle
d’une sphère de gel de silice greffée avec une cyclodextrine par l’intermédiaire d’un bras
extenseur.
2.8 PHASES MOBILES
Suivant un principe général, à une phase stationnaire polaire on oppose une phase mobile
peu ou pas polaire et vice-versa. La chromatographie est dite en phase normale dans le
premier cas et à polarité de phase inversée (« R − HPLC »). dans le second.