1 • Chromatographie, aspects généraux
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Ces rapports permettent de calculer les coefficients de réponse relatifs de 1 et de 2 vis-àvis de E choisi comme étalon, et désignés par K 1/E et K 2/E :
K 1/E =
K 1
K 2
=
m 1 · A E
m E · A 1
et
K 2/E =
K 2
K E
=
m 2 · A E
m E · A 2
Comme les masses m i réellement injectées sont proportionnelles aux concentrations massiques correspondantes C i , (m i = C i · V )., on en déduit les deux expressions suivantes :
K 1/E =
C 1 · A E
C E · A 1
et
K 2/E =
C 2 · A E
C E · A 2
1.16.2 Chromatographie de l’échantillon – Calcul des concentrations
La seconde étape de l’analyse consiste à chromatographier un volume quelconque d’une
solution faite avec l’échantillon à étudier et dans laquelle a été ajoutée une quantité connue
du composé E. Soient A
1 , A
2 et A
E , les aires du nouveau chromatogramme obtenu dans
les mêmes conditions opératoires. Si m
1 , m
2 et m
E désignent les masses de 1, 2 et E
réellement introduites dans la colonne, on aura :
m
1
m
E
= K 1/E
A
1
A
E
et
m
2
m
E
= K 2/E
A
2
A
E
À partir des coefficients relatifs calculés dans la première expérience ainsi que de la
concentration de l’étalon interne dans l’échantillon, C
E , connue, on accède à :
C
1 = C
E K 1/E
A
1
A
E
et
C
2 = C
E K 2/E
A
2
A
E
En généralisant à n constituants, on peut calculer la concentration massique du soluté i
au moyen de l’expression 1.37 :
C
i = C
E K i/E
A
i
A
E
(1.37)
et en déduire sa teneur dans l’échantillon, exprimée en %, (expression 1.38) :
x i % =
C
i
Masse d’échantillon prélevée
× 100
(1.38)
Cette méthode est encore plus précise si on fait plusieurs injections de l’étalon ou de
l’échantillon à doser. En conclusion cette méthode générale et reproductible exige néanmoins un bon choix de l’étalon interne dont les caractéristiques peuvent se résumer ainsi :
➤ il doit être pur et ne pas se trouver initialement dans l’échantillon ;
➤ son pic d’élution doit être bien résolu par rapport à tous ceux qui forment le chromatogramme de l’échantillon ;
➤ son temps de rétention doit être proche de celui (ou de ceux) du (ou des) soluté(s) à doser ;
➤ sa concentration doit être proche ou supérieure à celle des autres solutés pour être dans
les conditions d’une réponse linéaire du détecteur ;
➤ il doit être inerte vis-à-vis des composés de l’échantillon.
© Dunod – La photocopie non autorisée est un délit
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Ces rapports permettent de calculer les coefficients de réponse relatifs de 1 et de 2 vis-àvis de E choisi comme étalon, et désignés par K 1/E et K 2/E :
K 1/E =
K 1
K 2
=
m 1 · A E
m E · A 1
et
K 2/E =
K 2
K E
=
m 2 · A E
m E · A 2
Comme les masses m i réellement injectées sont proportionnelles aux concentrations massiques correspondantes C i , (m i = C i · V )., on en déduit les deux expressions suivantes :
K 1/E =
C 1 · A E
C E · A 1
et
K 2/E =
C 2 · A E
C E · A 2
1.16.2 Chromatographie de l’échantillon – Calcul des concentrations
La seconde étape de l’analyse consiste à chromatographier un volume quelconque d’une
solution faite avec l’échantillon à étudier et dans laquelle a été ajoutée une quantité connue
du composé E. Soient A
1 , A
2 et A
E , les aires du nouveau chromatogramme obtenu dans
les mêmes conditions opératoires. Si m
1 , m
2 et m
E désignent les masses de 1, 2 et E
réellement introduites dans la colonne, on aura :
m
1
m
E
= K 1/E
A
1
A
E
et
m
2
m
E
= K 2/E
A
2
A
E
À partir des coefficients relatifs calculés dans la première expérience ainsi que de la
concentration de l’étalon interne dans l’échantillon, C
E , connue, on accède à :
C
1 = C
E K 1/E
A
1
A
E
et
C
2 = C
E K 2/E
A
2
A
E
En généralisant à n constituants, on peut calculer la concentration massique du soluté i
au moyen de l’expression 1.37 :
C
i = C
E K i/E
A
i
A
E
(1.37)
et en déduire sa teneur dans l’échantillon, exprimée en %, (expression 1.38) :
x i % =
C
i
Masse d’échantillon prélevée
× 100
(1.38)
Cette méthode est encore plus précise si on fait plusieurs injections de l’étalon ou de
l’échantillon à doser. En conclusion cette méthode générale et reproductible exige néanmoins un bon choix de l’étalon interne dont les caractéristiques peuvent se résumer ainsi :
➤ il doit être pur et ne pas se trouver initialement dans l’échantillon ;
➤ son pic d’élution doit être bien résolu par rapport à tous ceux qui forment le chromatogramme de l’échantillon ;
➤ son temps de rétention doit être proche de celui (ou de ceux) du (ou des) soluté(s) à doser ;
➤ sa concentration doit être proche ou supérieure à celle des autres solutés pour être dans
les conditions d’une réponse linéaire du détecteur ;
➤ il doit être inerte vis-à-vis des composés de l’échantillon.
© Dunod – La photocopie non autorisée est un délit