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Partie 2 • Méthodes spectrométriques
d’eau et 13 kg de carbone). Dans d’autres cas on repère le signal des CH 2 des tissus graisseux. L’image finale est une présentation cartographique de la répartition en intensité d’un
même type de signal, le contraste étant relié aux variations des temps de relaxation des protons dans le plan choisi. Parmi les difficultés techniques spécifiques à cette méthode de RMN
tridimensionnelle, figure la focalisation (ou sélectivité spatiale) c’est-à-dire l’obtention du
signal issu d’un volume quasi ponctuel à l’intérieur d’un objet.
15.16 COUPLAGE CLHP/RMN
Le couplage CLHP/RMN constitue un challenge quand on sait que la tendance à la miniaturisation de la CLHP s’accompagne d’une diminution des quantités chromatographiées et
que la détection des signaux de résonance est peu sensible. Pendant longtemps on a donc
cru impossible la réalisation de méthodes couplées en tandem avec la RMN. L’enjeu est
cependant important principalement en recherche, la RMN étant la technique qui apporte le
plus d’informations structurales sur les composés organiques.
Les appareils ont fait maintenant suffisamment de progrès pour que le couplage
CLHP/RMN du proton devienne une réalité (fig. 15.23).
RMN
CLHP
ligne de transfert
CLHP/RMN
C
O
N
H
C
H
C
H 2
OH
CO 2 H
1
2
3
4 5
C
H 2
C
H
C
O
N
H
H
C
CO 2 H
CH 3
NH 2
1
2
3
4
5
6
7
Gly-Tyr ( = 6,8 min)
t
Phe-Ala ( = 9,4 min)
t
a
a
a
b
b
b
RMN 1H
δ
temps (min)
2
3
4
5
6
7
1
(ppm)
H
H
2
2 C
N
δ
2
3
4
5
6
7
1
(ppm)
5,6
4
4
2,1,3
7
5
3
2
1
11
10
9
8
7
6
Figure 15.24 Enregistrement obtenu au cours d’une expérience CLHP
couplée à une détection par RMN 1 H.
Séparation de deux dipeptides (5 mg chacun) avec identification des signaux. Pour plus
de clarté, les pics des solvants vers 2 et 5 ppm (acétonitrile et eau) ont été éliminés
(selon Sweeder et al., Analyt. Chem., 1999, 71(23), 5335).
Le principe consiste à faire passer la phase mobile après sortie du détecteur du chromatographe dans une micro-cellule à circulation placée dans l’appareil de RMN. Sans interrompre le débit (technique on-flow) on enregistre au cours du temps un grand nombre de
Partie 2 • Méthodes spectrométriques
d’eau et 13 kg de carbone). Dans d’autres cas on repère le signal des CH 2 des tissus graisseux. L’image finale est une présentation cartographique de la répartition en intensité d’un
même type de signal, le contraste étant relié aux variations des temps de relaxation des protons dans le plan choisi. Parmi les difficultés techniques spécifiques à cette méthode de RMN
tridimensionnelle, figure la focalisation (ou sélectivité spatiale) c’est-à-dire l’obtention du
signal issu d’un volume quasi ponctuel à l’intérieur d’un objet.
15.16 COUPLAGE CLHP/RMN
Le couplage CLHP/RMN constitue un challenge quand on sait que la tendance à la miniaturisation de la CLHP s’accompagne d’une diminution des quantités chromatographiées et
que la détection des signaux de résonance est peu sensible. Pendant longtemps on a donc
cru impossible la réalisation de méthodes couplées en tandem avec la RMN. L’enjeu est
cependant important principalement en recherche, la RMN étant la technique qui apporte le
plus d’informations structurales sur les composés organiques.
Les appareils ont fait maintenant suffisamment de progrès pour que le couplage
CLHP/RMN du proton devienne une réalité (fig. 15.23).
RMN
CLHP
ligne de transfert
CLHP/RMN
C
O
N
H
C
H
C
H 2
OH
CO 2 H
1
2
3
4 5
C
H 2
C
H
C
O
N
H
H
C
CO 2 H
CH 3
NH 2
1
2
3
4
5
6
7
Gly-Tyr ( = 6,8 min)
t
Phe-Ala ( = 9,4 min)
t
a
a
a
b
b
b
RMN 1H
δ
temps (min)
2
3
4
5
6
7
1
(ppm)
H
H
2
2 C
N
δ
2
3
4
5
6
7
1
(ppm)
5,6
4
4
2,1,3
7
5
3
2
1
11
10
9
8
7
6
Figure 15.24 Enregistrement obtenu au cours d’une expérience CLHP
couplée à une détection par RMN 1 H.
Séparation de deux dipeptides (5 mg chacun) avec identification des signaux. Pour plus
de clarté, les pics des solvants vers 2 et 5 ppm (acétonitrile et eau) ont été éliminés
(selon Sweeder et al., Analyt. Chem., 1999, 71(23), 5335).
Le principe consiste à faire passer la phase mobile après sortie du détecteur du chromatographe dans une micro-cellule à circulation placée dans l’appareil de RMN. Sans interrompre le débit (technique on-flow) on enregistre au cours du temps un grand nombre de