9 • Spectrométrie d’absorption de l’ultraviolet et du visible
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9.13 MÉTHODES DE CORRECTION DE LIGNE DE BASE
Certains échantillons, tels les fluides biologiques, contiennent des particules micellaires en
suspension qui créent par diffusion de la lumière (effet Tyndall) une absorption supplémentaire. Celle-ci varie de manière régulière avec la longueur d’onde (fig. 9.27).
absorbance
absorbance
λ 1
λ 1
λ 2
λ 2
λ 3
λ 3
A'
A' 2
a
b
A 1
A 2
A 3
x
y
nm
nm
a
b
Figure 9.27 Illustration se rapportant aux calculs de la méthode de Morton et Stubbs.
Plusieurs méthodes cherchent à corriger ce phénomène en retranchant de l’absorbance
mesurée la part qui n’est pas due à l’analyte. Il s’agit en fait de corrections de la ligne de
base faites à partir de mesures réalisées à plusieurs longueurs d’onde.
9.13.1 Modélisation par une fonction polynomiale
On suppose que la variation de la ligne de base est représentable par une fonction A = k l
n .
Pour trouver k et n, on repère une plage où l’analyte n’absorbe pas afin que le logiciel utilise
cette zone de la courbe pour calculer ces coefficients par une méthode des moindres carrés,
(sachant que log a = log k + n log l). Ensuite quelle que soit la longueur d’onde du dosage,
on pourra retrancher l’absorbance due au fond absorbant.
9.13.2 Méthode des trois points (Morton-Stubbs)
La méthode de Morton et Stubbs (ainsi que la méthode faisant appel aux courbes dérivées,
cf. 9.16) permet une correction efficace de la ligne de base à condition que l’absorption sousjacente varie linéairement dans la zone de mesure. Ainsi, dans une situation telle que celle
représentée sur la figure 9.27a, il faut, pour quantifier le composé, corriger l’absorbance A 2
lue au maximum l 2 en retranchant ce qui correspond aux valeurs notées x et y.
Pour cela on va faire un spectre de référence du composé pur, afin de choisir deux longueurs d’onde l 1 et l 3 telles que les coefficients d’absorbance soient les mêmes (fig. 9.27b).
Ainsi sur la figure, on a pour l 1 et l 3 la même absorbance A et une absorbance A
2 au maximum l 2 . On calcule le rapport R entre ces deux valeurs (R = A
2 / A
). On effectue ensuite,
sur le spectre de l’échantillon à doser, le rapport des absorbances à ces deux mêmes longueurs d’onde. À condition d’assimiler la ligne de base à une droite de même pente que le
segment ab, la valeur de x peut alors être déduite par calcul (voir figure) :
x = (A 1 − A 3 )
(l 3 − l 2 )
(l 3 − l 1 )
(9.20)
© Dunod – La photocopie non autorisée est un délit
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9.13 MÉTHODES DE CORRECTION DE LIGNE DE BASE
Certains échantillons, tels les fluides biologiques, contiennent des particules micellaires en
suspension qui créent par diffusion de la lumière (effet Tyndall) une absorption supplémentaire. Celle-ci varie de manière régulière avec la longueur d’onde (fig. 9.27).
absorbance
absorbance
λ 1
λ 1
λ 2
λ 2
λ 3
λ 3
A'
A' 2
a
b
A 1
A 2
A 3
x
y
nm
nm
a
b
Figure 9.27 Illustration se rapportant aux calculs de la méthode de Morton et Stubbs.
Plusieurs méthodes cherchent à corriger ce phénomène en retranchant de l’absorbance
mesurée la part qui n’est pas due à l’analyte. Il s’agit en fait de corrections de la ligne de
base faites à partir de mesures réalisées à plusieurs longueurs d’onde.
9.13.1 Modélisation par une fonction polynomiale
On suppose que la variation de la ligne de base est représentable par une fonction A = k l
n .
Pour trouver k et n, on repère une plage où l’analyte n’absorbe pas afin que le logiciel utilise
cette zone de la courbe pour calculer ces coefficients par une méthode des moindres carrés,
(sachant que log a = log k + n log l). Ensuite quelle que soit la longueur d’onde du dosage,
on pourra retrancher l’absorbance due au fond absorbant.
9.13.2 Méthode des trois points (Morton-Stubbs)
La méthode de Morton et Stubbs (ainsi que la méthode faisant appel aux courbes dérivées,
cf. 9.16) permet une correction efficace de la ligne de base à condition que l’absorption sousjacente varie linéairement dans la zone de mesure. Ainsi, dans une situation telle que celle
représentée sur la figure 9.27a, il faut, pour quantifier le composé, corriger l’absorbance A 2
lue au maximum l 2 en retranchant ce qui correspond aux valeurs notées x et y.
Pour cela on va faire un spectre de référence du composé pur, afin de choisir deux longueurs d’onde l 1 et l 3 telles que les coefficients d’absorbance soient les mêmes (fig. 9.27b).
Ainsi sur la figure, on a pour l 1 et l 3 la même absorbance A et une absorbance A
2 au maximum l 2 . On calcule le rapport R entre ces deux valeurs (R = A
2 / A
). On effectue ensuite,
sur le spectre de l’échantillon à doser, le rapport des absorbances à ces deux mêmes longueurs d’onde. À condition d’assimiler la ligne de base à une droite de même pente que le
segment ab, la valeur de x peut alors être déduite par calcul (voir figure) :
x = (A 1 − A 3 )
(l 3 − l 2 )
(l 3 − l 1 )
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© Dunod – La photocopie non autorisée est un délit