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Partie 1 • Méthodes séparatives
sont pas miscibles à la solution, emprisonnent les composés neutres, plus ou moins efficacement, par affinité du type hydrophile/hydrophobe (fig. 8.9). Ce type d’électrophorèse est
donc utile pour les composés qui ont tendance à migrer sans séparation. En ajoutant des cyclodextrines modifiées on peut déterminer la pureté optique des composés. Il se forme alors
des complexes d’inclusion de stabilité différente avec les couples d’énantiomères (cf. 3.6 et
fig. 8.9).
cathode
R = 23
5
10 temps de rétention (min)
Absorbance (AUx10E-4)
H
H H
C C
NH2
Me
Figure 8.9 Séparation de composés neutres par usage de surfactants (technique MEKC).
La partie lipophile du surfactant, ici un alkylsulfonate, se fixe plus ou moins facilement sur certaines espèces du substrat S. Les micelles insolubles ainsi formées, bien
que chargées négativement, sont ensuite entraînées vers la cathode par le flux électroosmotique (adapté d’un document Hewlett-Packard). Électrophorégramme d’un échantillon d’amphétamine racémique en présence de cyclodextrine. L’électrolyte NaH 2 PO 4
25 mMol (pH 2,5) contient 5 % de gamma-cyclodextrine polysulfatée. À ce pH le flux
électroosmotique est négligeable. Les ions hydrogénosulfate des cyclodextrines se dirigent vers l’anode entraînant les molécules d’amphétamines retenues dans leur cavité
hydrophobe. Les deux énantiomères en quantité égale forment deux complexes diastéréomériques qui migrent à des vitesses différentes. L’anode est ici raccordée côté détecteur. Reproduit avec l’autorisation de la société Beckman Coulter Inc. (USA).
8.4.3 Électrophorèse capillaire sur gel (CGE)
C’est la transposition de l’électrophorèse sur gel de polyacrylamide (PAGE) ou d’agarose.
Le capillaire est rempli avec un électrolyte contenant un gel. Celui-ci produit un effet de
filtration qui ralentit les grosses molécules et qui minimise les phénomènes de convection ou
de diffusion. Les oligonucléotides, peu fragiles, peuvent être ainsi séparés. Le flux électroosmotique reste faible.
Partie 1 • Méthodes séparatives
sont pas miscibles à la solution, emprisonnent les composés neutres, plus ou moins efficacement, par affinité du type hydrophile/hydrophobe (fig. 8.9). Ce type d’électrophorèse est
donc utile pour les composés qui ont tendance à migrer sans séparation. En ajoutant des cyclodextrines modifiées on peut déterminer la pureté optique des composés. Il se forme alors
des complexes d’inclusion de stabilité différente avec les couples d’énantiomères (cf. 3.6 et
fig. 8.9).
cathode
R = 23
5
10 temps de rétention (min)
Absorbance (AUx10E-4)
H
H H
C C
NH2
Me
Figure 8.9 Séparation de composés neutres par usage de surfactants (technique MEKC).
La partie lipophile du surfactant, ici un alkylsulfonate, se fixe plus ou moins facilement sur certaines espèces du substrat S. Les micelles insolubles ainsi formées, bien
que chargées négativement, sont ensuite entraînées vers la cathode par le flux électroosmotique (adapté d’un document Hewlett-Packard). Électrophorégramme d’un échantillon d’amphétamine racémique en présence de cyclodextrine. L’électrolyte NaH 2 PO 4
25 mMol (pH 2,5) contient 5 % de gamma-cyclodextrine polysulfatée. À ce pH le flux
électroosmotique est négligeable. Les ions hydrogénosulfate des cyclodextrines se dirigent vers l’anode entraînant les molécules d’amphétamines retenues dans leur cavité
hydrophobe. Les deux énantiomères en quantité égale forment deux complexes diastéréomériques qui migrent à des vitesses différentes. L’anode est ici raccordée côté détecteur. Reproduit avec l’autorisation de la société Beckman Coulter Inc. (USA).
8.4.3 Électrophorèse capillaire sur gel (CGE)
C’est la transposition de l’électrophorèse sur gel de polyacrylamide (PAGE) ou d’agarose.
Le capillaire est rempli avec un électrolyte contenant un gel. Celui-ci produit un effet de
filtration qui ralentit les grosses molécules et qui minimise les phénomènes de convection ou
de diffusion. Les oligonucléotides, peu fragiles, peuvent être ainsi séparés. Le flux électroosmotique reste faible.