8 • Électrophorèse capillaire et électrochromatographie
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conduit à des pics « en négatif » (fig. 8.8). Cette variation d’absorbance est reliée linéairement à la concentration de l’ion détecté.
➤ Détection par fluorescence. Ce procédé est plus sensible si on emploie une source laser
très intense. Pour étendre le champ d’application de cette forme de détection on peut
faire une pré- ou postdérivation des analytes pour les rendre porteurs d’un fluorophore
(fig. 8.7).
➤ Détection électrochimique. Réalisable en insérant de minuscules électrodes dans le capillaire.
➤ Détection par spectrométrie de masse. Le très faible débit du capillaire se prête bien aux
méthodes d’ionisation à pression atmosphérique (cf. chapitre 15), ce qui permet l’étude
des composés biologiques (fig. 15.7). Procédé surtout utilisé en analyse pharmaceutique.
abs.
abs.
détection normale
détection inverse
capillaire
capillaire
-0,01
-0,005
0,00
0,005
0,01
0,015
absorbance
1
2
3
4
5 min
Figure 8.8 Séparation des principaux acides organiques dans un vin blanc par détection inverse.
Les deux acides malique et lactique témoignent de la fermentation classique malolactique (selon une note d’application de la société TSP).
8.4 TECHNIQUES ÉLECTROPHORÉTIQUES
8.4.1 Électrophorèse capillaire de zone (CZE)
C’est le procédé d’électrophorèse le plus courant. Le capillaire est parcouru par l’électrolyte
constitué soit par un milieu tampon qui, selon l’application, est acide (phosphate ou citrate)
ou basique (borate), soit par un ampholyte (molécule possédant une fonction acide et une
fonction basique). Le flux électro-osmotique croît avec le pH de la phase liquide. Il peut
être rendu nul. Ce procédé est encore appelé électrophorèse en solution libre par opposition
à la CGE (§ 8.4.3).
8.4.2 Électrophorèse capillaire électrocinétique micellaire (MEKC)
Dans cette variante au procédé de base décrit précédemment, on ajoute dans la phase mobile
un composé cationique ou anionique, tel le dodécylsulfate de sodium, pour former des micelles dont le caractère ionique les rend porteuses de charges. Ces micro-gouttelettes, qui ne
© Dunod – La photocopie non autorisée est un délit
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conduit à des pics « en négatif » (fig. 8.8). Cette variation d’absorbance est reliée linéairement à la concentration de l’ion détecté.
➤ Détection par fluorescence. Ce procédé est plus sensible si on emploie une source laser
très intense. Pour étendre le champ d’application de cette forme de détection on peut
faire une pré- ou postdérivation des analytes pour les rendre porteurs d’un fluorophore
(fig. 8.7).
➤ Détection électrochimique. Réalisable en insérant de minuscules électrodes dans le capillaire.
➤ Détection par spectrométrie de masse. Le très faible débit du capillaire se prête bien aux
méthodes d’ionisation à pression atmosphérique (cf. chapitre 15), ce qui permet l’étude
des composés biologiques (fig. 15.7). Procédé surtout utilisé en analyse pharmaceutique.
abs.
abs.
détection normale
détection inverse
capillaire
capillaire
-0,01
-0,005
0,00
0,005
0,01
0,015
absorbance
1
2
3
4
5 min
Figure 8.8 Séparation des principaux acides organiques dans un vin blanc par détection inverse.
Les deux acides malique et lactique témoignent de la fermentation classique malolactique (selon une note d’application de la société TSP).
8.4 TECHNIQUES ÉLECTROPHORÉTIQUES
8.4.1 Électrophorèse capillaire de zone (CZE)
C’est le procédé d’électrophorèse le plus courant. Le capillaire est parcouru par l’électrolyte
constitué soit par un milieu tampon qui, selon l’application, est acide (phosphate ou citrate)
ou basique (borate), soit par un ampholyte (molécule possédant une fonction acide et une
fonction basique). Le flux électro-osmotique croît avec le pH de la phase liquide. Il peut
être rendu nul. Ce procédé est encore appelé électrophorèse en solution libre par opposition
à la CGE (§ 8.4.3).
8.4.2 Électrophorèse capillaire électrocinétique micellaire (MEKC)
Dans cette variante au procédé de base décrit précédemment, on ajoute dans la phase mobile
un composé cationique ou anionique, tel le dodécylsulfate de sodium, pour former des micelles dont le caractère ionique les rend porteuses de charges. Ces micro-gouttelettes, qui ne
© Dunod – La photocopie non autorisée est un délit