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Partie 1 • Méthodes séparatives
La méthode de l’injection hydrostatique rend l’opération moins précise qu’en CLHP. Il
n’existe pas de boucles d’injection pour des volumes qui sont ici compris entre 5 et 50 nL.
La quantité rentrant dans le capillaire dépend de beaucoup de paramètres dont ceux qui
figurent dans la formule de Poiseuille relative au débit dans un tuyau d’un liquide ayant une
viscosité dynamique h. L’application de cette formule donnerait une valeur approximative
de ce qu’on pourrait appeler le « débit entrant » dans le capillaire.
D = DP
pr
4
8hL
Son intérêt est plutôt de montrer que si le rayon r du capillaire est doublé le volume
entrant sera 16 fois plus grand, ou encore que ce volume est proportionnel à la différence de
pression DP et qu’une augmentation de la longueur L du capillaire produit l’effet inverse. En
conclusion pour améliorer les performances quantitatives en ECHP, il faut utiliser un étalon
interne. On utilisera soit une solution de dilution contenant l’étalon interne pour préparer
toutes les solutions soit on ajoutera un volume précis d’une solution de l’étalon à ces mêmes
solutions.
8.3.2 Modes de détection
➤ Détection UV/VIS (cf. chapitre 9). On mesure l’intensité de la lumière passant à travers le
capillaire dont une petite zone de revêtement opaque a été éliminée. Le capillaire coupe
le trajet optique allant de la source au photomultiplicateur (fig. 8.7). On évite ainsi tout
volume mort. Le très faible parcours optique dans le capillaire rend peu sensible ce mode
de détection si la solution absorbe peu, d’autant que souvent les matrices sont ellesmêmes absorbantes.
+
détecteur
Source
détecteur
sucre-CHO
sucre-CH=N
HO
HO
SO H
3
SO H
3
SO H
3
SO H
3
NH 2
Figure 8.7 Détection UV et dérivation post-séparation.
a) La cellule de mesure est constituée par le capillaire lui-même ; b) la post-dérivation
peut être réalisée en coupant le capillaire un peu en amont du détecteur et en introduisant le réactif. Exemple de réaction de dérivation pour transformer un sucre en un
dérivé fluorescent.
Détection UV/Vis en mode inverse. Les ions inorganiques qui absorbent très peu la
lumière peuvent néanmoins être détectés par mesure d’absorbance : on choisit un électrolyte rendu très absorbant par ajout d’un chromate ou d’un phtalate. Dans ces conditions,
lorsqu’un ion de l’échantillon arrive au niveau du détecteur, l’absorbance diminue, ce qui
Partie 1 • Méthodes séparatives
La méthode de l’injection hydrostatique rend l’opération moins précise qu’en CLHP. Il
n’existe pas de boucles d’injection pour des volumes qui sont ici compris entre 5 et 50 nL.
La quantité rentrant dans le capillaire dépend de beaucoup de paramètres dont ceux qui
figurent dans la formule de Poiseuille relative au débit dans un tuyau d’un liquide ayant une
viscosité dynamique h. L’application de cette formule donnerait une valeur approximative
de ce qu’on pourrait appeler le « débit entrant » dans le capillaire.
D = DP
pr
4
8hL
Son intérêt est plutôt de montrer que si le rayon r du capillaire est doublé le volume
entrant sera 16 fois plus grand, ou encore que ce volume est proportionnel à la différence de
pression DP et qu’une augmentation de la longueur L du capillaire produit l’effet inverse. En
conclusion pour améliorer les performances quantitatives en ECHP, il faut utiliser un étalon
interne. On utilisera soit une solution de dilution contenant l’étalon interne pour préparer
toutes les solutions soit on ajoutera un volume précis d’une solution de l’étalon à ces mêmes
solutions.
8.3.2 Modes de détection
➤ Détection UV/VIS (cf. chapitre 9). On mesure l’intensité de la lumière passant à travers le
capillaire dont une petite zone de revêtement opaque a été éliminée. Le capillaire coupe
le trajet optique allant de la source au photomultiplicateur (fig. 8.7). On évite ainsi tout
volume mort. Le très faible parcours optique dans le capillaire rend peu sensible ce mode
de détection si la solution absorbe peu, d’autant que souvent les matrices sont ellesmêmes absorbantes.
+
détecteur
Source
détecteur
sucre-CHO
sucre-CH=N
HO
HO
SO H
3
SO H
3
SO H
3
SO H
3
NH 2
Figure 8.7 Détection UV et dérivation post-séparation.
a) La cellule de mesure est constituée par le capillaire lui-même ; b) la post-dérivation
peut être réalisée en coupant le capillaire un peu en amont du détecteur et en introduisant le réactif. Exemple de réaction de dérivation pour transformer un sucre en un
dérivé fluorescent.
Détection UV/Vis en mode inverse. Les ions inorganiques qui absorbent très peu la
lumière peuvent néanmoins être détectés par mesure d’absorbance : on choisit un électrolyte rendu très absorbant par ajout d’un chromate ou d’un phtalate. Dans ces conditions,
lorsqu’un ion de l’échantillon arrive au niveau du détecteur, l’absorbance diminue, ce qui