7 • Chromatographie d’exclusion stérique
119
7.5 DOMAINES D’APPLICATION
Comme il est possible de séparer des masses nominales allant de 200 à plus de 10
7 Da,
les principales applications se trouvent dans le domaine de l’analyse des polymères, qu’ils
soient d’origine naturelle ou de synthèse. L’absence d’interaction chimique avec la phase
stationnaire, associée à une élution rapide et la récupération totale des analytes, constituent
autant d’avantages. La mise au point des analyses est rapide, sachant aussi qu’on n’utilise
pas de gradient d’élution puisqu’il n’y a pas d’interaction soluté/phase mobile.
Le choix de la phase stationnaire adaptée à la séparation envisagée se fait à partir des
courbes d’étalonnage des différentes colonnes disponibles. On retient celle dont la courbe
en masses présente une partie linéaire de faible pente recouvrant toute l’étendue des masses
présentes dans l’échantillon (fig. 7.5). Il faut que l’étalonnage soit réalisé avec des standards
de même type, les macromolécules pouvant adopter des formes variées allant de la pelote à
l’aspect filiforme. Ainsi le tableau 7.1 montre que les domaines de séparation des 3 gels de
la figure 7.3 sont différents suivant les standards utilisés.
masses étalons
1 - 8 500 000
2 - 1 030 000
3 - 156 000
4 -
28 500
5 -
3 250
6 - 3 040 000
7 - 330 000
8 -
66 000
9 -
9 200
10 -
580
log M (Da)
2 colonnes PLgel-MIXED-B 10µm
de 300 x 7,5 mm bout à bout
éluant : tétrahydrofurane
débit 1 mL/min
Injection 25 µL à la conc. de 0,1 %
détection UV
1
2
3
4
5
6
7
8
9
10
18
9
1 2
15
18
9
1 2
1 5
min (ou mL)
min (ou mL)
7
5
6
4
3
2
Figure 7.5 Courbe d’étalonnage d’aspect linéaire d’une colonne de perméation de gel.
En utilisant, comme le montre la figure, deux mélanges complémentaires d’étalons de
polystyrène on dispose d’un nombre suffisant de masses pour étalonner la colonne. La
droite obtenue, qui recouvre un large domaine de masses (conséquence d’une phase
stationnaire « panachée »), permet, dans un second temps de déterminer la masse
moléculaire d’un polystyrène inconnu. En bas, à droite, le dessin symbolise une macromolécule repliée sur elle-même par effet du solvant. On désigne ce volume par volume
hydrodynamique de la macromolécule.
© Dunod – La photocopie non autorisée est un délit
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7.5 DOMAINES D’APPLICATION
Comme il est possible de séparer des masses nominales allant de 200 à plus de 10
7 Da,
les principales applications se trouvent dans le domaine de l’analyse des polymères, qu’ils
soient d’origine naturelle ou de synthèse. L’absence d’interaction chimique avec la phase
stationnaire, associée à une élution rapide et la récupération totale des analytes, constituent
autant d’avantages. La mise au point des analyses est rapide, sachant aussi qu’on n’utilise
pas de gradient d’élution puisqu’il n’y a pas d’interaction soluté/phase mobile.
Le choix de la phase stationnaire adaptée à la séparation envisagée se fait à partir des
courbes d’étalonnage des différentes colonnes disponibles. On retient celle dont la courbe
en masses présente une partie linéaire de faible pente recouvrant toute l’étendue des masses
présentes dans l’échantillon (fig. 7.5). Il faut que l’étalonnage soit réalisé avec des standards
de même type, les macromolécules pouvant adopter des formes variées allant de la pelote à
l’aspect filiforme. Ainsi le tableau 7.1 montre que les domaines de séparation des 3 gels de
la figure 7.3 sont différents suivant les standards utilisés.
masses étalons
1 - 8 500 000
2 - 1 030 000
3 - 156 000
4 -
28 500
5 -
3 250
6 - 3 040 000
7 - 330 000
8 -
66 000
9 -
9 200
10 -
580
log M (Da)
2 colonnes PLgel-MIXED-B 10µm
de 300 x 7,5 mm bout à bout
éluant : tétrahydrofurane
débit 1 mL/min
Injection 25 µL à la conc. de 0,1 %
détection UV
1
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8
9
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18
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1 2
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18
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1 2
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min (ou mL)
min (ou mL)
7
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3
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Figure 7.5 Courbe d’étalonnage d’aspect linéaire d’une colonne de perméation de gel.
En utilisant, comme le montre la figure, deux mélanges complémentaires d’étalons de
polystyrène on dispose d’un nombre suffisant de masses pour étalonner la colonne. La
droite obtenue, qui recouvre un large domaine de masses (conséquence d’une phase
stationnaire « panachée »), permet, dans un second temps de déterminer la masse
moléculaire d’un polystyrène inconnu. En bas, à droite, le dessin symbolise une macromolécule repliée sur elle-même par effet du solvant. On désigne ce volume par volume
hydrodynamique de la macromolécule.
© Dunod – La photocopie non autorisée est un délit