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Partie 1 • Méthodes séparatives
plaque de CCM
distances de migration
plaque RP-18
détection UV à 254 nm
éluant acétone/eau 50:50 v/v
migration ascendante
en 20 min pour 8 cm.
0
R f
1
Me
Me
R 2
O
O
CH 2 OH
R 1
1 - cortexone, R = H et R = H
2 - corticostérone, R = OH et R = H
3 - cortisone, R = O et R = OH
1
2
1
2
1
2
absorbance (échelle arbit).
départ
0
2
4
6
8 cm
1 2 3
marque
du front
d'élution
Figure 5.6 Séparation de 3 stéroïdes en CCM sur phase de polarité inversée.
La distance de migration augmente avec la polarité du composé. Le pseudochromatogramme a été obtenu par scannérisation de la plaque CCM. La même séparation menée
en CLHP conduirait à un chromatogramme dans lequel l’ordre des pics serait inversé,
un composé fortement retenu ayant un plus grand temps d’élution.
La CCM est bien loin d’être la technique d’appoint qu’elle était à ses débuts. Pour beaucoup d’applications, elle permet d’obtenir des résultats de qualité, comparables à ceux de
la CLHP. Bien qu’elle demande encore actuellement plus d’intervention humaine que cette
dernière, l’utilisation des nouveaux outils perfectionnés pour déposer, développer en faisant
usage de gradients d’élution, révéler et lire la plaque, lui confère la reproductibilité nécessaire. Une récente avancée technologique consiste à faire migrer l’éluant à vitesse constante
en exerçant une surpression par un gaz au niveau de la cuve de développement spécialement
prévue à cet effet. On gagne en temps et en qualité de séparation.
Comparée à la CLHP, la CCM est apte à traiter plus d’échantillons dans le même temps,
par mise en œuvre d’analyses faites en parallèle sur la même plaque. La préparation des
échantillons est moins contraignante qu’en CLHP la plaque étant à usage unique, ce qui est
très utile principalement pour les échantillons biologiques. La plaque de CCM sur laquelle
des produits ont été séparés est aussi un moyen, provisoire, de conserver des très petits
échantillons, qui après extraction peuvent servir à d’autres analyses (spectrométrie de masse
par exemple).
QUELQUES SITES SUR INTERNET
www.alltech.com
www.analtech.com
www.bioscan.com
www.camag.com
www.macherey-nagel.com
www.whatman.com
Partie 1 • Méthodes séparatives
plaque de CCM
distances de migration
plaque RP-18
détection UV à 254 nm
éluant acétone/eau 50:50 v/v
migration ascendante
en 20 min pour 8 cm.
0
R f
1
Me
Me
R 2
O
O
CH 2 OH
R 1
1 - cortexone, R = H et R = H
2 - corticostérone, R = OH et R = H
3 - cortisone, R = O et R = OH
1
2
1
2
1
2
absorbance (échelle arbit).
départ
0
2
4
6
8 cm
1 2 3
marque
du front
d'élution
Figure 5.6 Séparation de 3 stéroïdes en CCM sur phase de polarité inversée.
La distance de migration augmente avec la polarité du composé. Le pseudochromatogramme a été obtenu par scannérisation de la plaque CCM. La même séparation menée
en CLHP conduirait à un chromatogramme dans lequel l’ordre des pics serait inversé,
un composé fortement retenu ayant un plus grand temps d’élution.
La CCM est bien loin d’être la technique d’appoint qu’elle était à ses débuts. Pour beaucoup d’applications, elle permet d’obtenir des résultats de qualité, comparables à ceux de
la CLHP. Bien qu’elle demande encore actuellement plus d’intervention humaine que cette
dernière, l’utilisation des nouveaux outils perfectionnés pour déposer, développer en faisant
usage de gradients d’élution, révéler et lire la plaque, lui confère la reproductibilité nécessaire. Une récente avancée technologique consiste à faire migrer l’éluant à vitesse constante
en exerçant une surpression par un gaz au niveau de la cuve de développement spécialement
prévue à cet effet. On gagne en temps et en qualité de séparation.
Comparée à la CLHP, la CCM est apte à traiter plus d’échantillons dans le même temps,
par mise en œuvre d’analyses faites en parallèle sur la même plaque. La préparation des
échantillons est moins contraignante qu’en CLHP la plaque étant à usage unique, ce qui est
très utile principalement pour les échantillons biologiques. La plaque de CCM sur laquelle
des produits ont été séparés est aussi un moyen, provisoire, de conserver des très petits
échantillons, qui après extraction peuvent servir à d’autres analyses (spectrométrie de masse
par exemple).
QUELQUES SITES SUR INTERNET
www.alltech.com
www.analtech.com
www.bioscan.com
www.camag.com
www.macherey-nagel.com
www.whatman.com