Chapitre III : Matériels et méthodes
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- On met chaque échantillon lyophilisé et broyé dans une cartouche tarée et on pèse, soit m ce
poids ;
- On place les ballons vides et pesés sur la plaque chauffante, et les cartouches dans les matras ;
- On verse environ 150 à 200 ml d’éther éthylique dans chaque matras et on ferme ;
- On chauffe progressivement jusqu'à l’ébullition du solvant, on maintient la même température
de sorte à maintenir l’ébullition de solvant stable. On garde le même rythme pendant 5h30min
qui correspond à 34 cycles (en moyenne 10 min), afin de dissoudre tous les lipides présents
dans l’échantillon à la fin de l’extraction, on laisse les ballons refroidir ;
- On met chaque ballon contenant le solvant et l’extrait (lipides) dans un évaporateur rotatif
« Buchi Rotavapeur R.210 » (Fig. III.23, Annexe III). à 40° C et à une vitesse de rotation de 6
à 7 tours/mn, pour concentrer l’extrait et récupérer le solvant ;
- On sèche les ballons dans l’étuve à 37° C, puis on les laisse refroidir dans un dessiccateur et
on pèse (ballons remplis), soit P ce poids.
D. Expression des résultats
La quantité des lipides est déterminée selon la formule suivante :
% lipides =
M
m
* 100
(21)
M : quantité des lipides (P – P0) en g
P : poids du ballon rempli de lipides en g
P0 : poids du ballon vide en g
m : poids de l’échantillon en g
III.2.6.2.3. Dosage des glucides :
Le dosage des sucres totaux solubles est réalisé par la méthode de Dubois et al., (1956), Méthode
au phénol-sulfurique.
A. Présentation de la méthode :
La méthode de Dubois et al (1956) permet de doser les oses en utilisant le phénol et l'acide
sulfurique concentré, en présence de ces deux réactifs, les oses donnent une couleur jaune-orange
dont l'intensité est proportionnelle à la concentration des glucides, la densité optique est déterminée
entre 450 à 550 nm (Nielsen, 1997).
Une courbe d’étalonnage est effectuée à partir d’une solution de glucose.
B. La courbe d’étalonnage :
Introduire 87.5 mg du glucose dans 500 ml d’eau distillée, préparer la solution de phénol à 5%.
5 tubes à essais sont remplis de la solution glucose (0ml, 2.5ml, 5ml, 7.5ml, 10ml) puis complétés
avec de l’eau distillée jusqu’à 10 ml. Ajouter 1ml de la solution phénol + 5ml de H2SO4.
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- On met chaque échantillon lyophilisé et broyé dans une cartouche tarée et on pèse, soit m ce
poids ;
- On place les ballons vides et pesés sur la plaque chauffante, et les cartouches dans les matras ;
- On verse environ 150 à 200 ml d’éther éthylique dans chaque matras et on ferme ;
- On chauffe progressivement jusqu'à l’ébullition du solvant, on maintient la même température
de sorte à maintenir l’ébullition de solvant stable. On garde le même rythme pendant 5h30min
qui correspond à 34 cycles (en moyenne 10 min), afin de dissoudre tous les lipides présents
dans l’échantillon à la fin de l’extraction, on laisse les ballons refroidir ;
- On met chaque ballon contenant le solvant et l’extrait (lipides) dans un évaporateur rotatif
« Buchi Rotavapeur R.210 » (Fig. III.23, Annexe III). à 40° C et à une vitesse de rotation de 6
à 7 tours/mn, pour concentrer l’extrait et récupérer le solvant ;
- On sèche les ballons dans l’étuve à 37° C, puis on les laisse refroidir dans un dessiccateur et
on pèse (ballons remplis), soit P ce poids.
D. Expression des résultats
La quantité des lipides est déterminée selon la formule suivante :
% lipides =
M
m
* 100
(21)
M : quantité des lipides (P – P0) en g
P : poids du ballon rempli de lipides en g
P0 : poids du ballon vide en g
m : poids de l’échantillon en g
III.2.6.2.3. Dosage des glucides :
Le dosage des sucres totaux solubles est réalisé par la méthode de Dubois et al., (1956), Méthode
au phénol-sulfurique.
A. Présentation de la méthode :
La méthode de Dubois et al (1956) permet de doser les oses en utilisant le phénol et l'acide
sulfurique concentré, en présence de ces deux réactifs, les oses donnent une couleur jaune-orange
dont l'intensité est proportionnelle à la concentration des glucides, la densité optique est déterminée
entre 450 à 550 nm (Nielsen, 1997).
Une courbe d’étalonnage est effectuée à partir d’une solution de glucose.
B. La courbe d’étalonnage :
Introduire 87.5 mg du glucose dans 500 ml d’eau distillée, préparer la solution de phénol à 5%.
5 tubes à essais sont remplis de la solution glucose (0ml, 2.5ml, 5ml, 7.5ml, 10ml) puis complétés
avec de l’eau distillée jusqu’à 10 ml. Ajouter 1ml de la solution phénol + 5ml de H2SO4.