Chapitre II
matériels et méthodes
32
2.4.2. Analyses bactériologiques
Le principe général des techniques d’analyses microbiologiques des eaux consiste à
ensemencer une quantité connue d’eau à analyser sur un milieu de culture adapté, solide ou
liquide. On suppose que pendant l’incubation, chaque microorganisme présent se développe
pour donner soit une colonie visible sur un milieu solide soit, provoquer des changements
d’apparence d’un milieu liquide, essentiellement un trouble de celui-ci.
Le choix d’une technique d’ensemencement dépend de la nature des microorganismes
recherchés, de celle de l’eau et des raisons qui ont conduit à l’analyse (Rejsek, 2002).
Les germes recherchés sont, la flore totale, les coliformes totaux, coliformes thermotolérants
(dont E. coli), les Streptocoques du groupe D et les Salmonelles.
Méthode de dénombrement
Pour la flore totale, les coliformes totaux et les coliformes fécaux, nous avons opté pour la
méthode de dénombrement par filtration sur membrane (MF) qui est une méthode universelle,
pratique et reproductible.
Le principe
Filtration d’un volume d’eau sur la membrane quadrillée d’ester de cellulose de porosité de
0,22 ou 0,45µ m, la membrane est ensuite déposée à la surface d’un milieu gélosé en boite de
Petri, les nutriments diffusent à travers les pores du filtre en permettant la croissance des
colonies que l’on peut ensuite dénombrer en unité formant colonie (UFC). Cette méthode à
comme avantages :
Absence du choc thermique ;
Différentiation aisée des colonies ;
Possibilité de repiquage.
L’appareil
L’appareil est un simple système de filtration sous pression réduite (rompe de filtration) de
marque Sartorius. Il contient un support filtre qui reçoit, sur une partie à larges pores, la
membrane de filtration. Le godet permet de recevoir l’eau à analyser. Les deux parties doivent
s’assembler de manière solide par aimants, par caoutchoucs. Enfin, l’ensemble doit être
stérilisé à 170° C pendant 2h ou par un flambage à la flamme.
Figure n° 16: Dispositif de filtration
matériels et méthodes
32
2.4.2. Analyses bactériologiques
Le principe général des techniques d’analyses microbiologiques des eaux consiste à
ensemencer une quantité connue d’eau à analyser sur un milieu de culture adapté, solide ou
liquide. On suppose que pendant l’incubation, chaque microorganisme présent se développe
pour donner soit une colonie visible sur un milieu solide soit, provoquer des changements
d’apparence d’un milieu liquide, essentiellement un trouble de celui-ci.
Le choix d’une technique d’ensemencement dépend de la nature des microorganismes
recherchés, de celle de l’eau et des raisons qui ont conduit à l’analyse (Rejsek, 2002).
Les germes recherchés sont, la flore totale, les coliformes totaux, coliformes thermotolérants
(dont E. coli), les Streptocoques du groupe D et les Salmonelles.
Méthode de dénombrement
Pour la flore totale, les coliformes totaux et les coliformes fécaux, nous avons opté pour la
méthode de dénombrement par filtration sur membrane (MF) qui est une méthode universelle,
pratique et reproductible.
Le principe
Filtration d’un volume d’eau sur la membrane quadrillée d’ester de cellulose de porosité de
0,22 ou 0,45µ m, la membrane est ensuite déposée à la surface d’un milieu gélosé en boite de
Petri, les nutriments diffusent à travers les pores du filtre en permettant la croissance des
colonies que l’on peut ensuite dénombrer en unité formant colonie (UFC). Cette méthode à
comme avantages :
Absence du choc thermique ;
Différentiation aisée des colonies ;
Possibilité de repiquage.
L’appareil
L’appareil est un simple système de filtration sous pression réduite (rompe de filtration) de
marque Sartorius. Il contient un support filtre qui reçoit, sur une partie à larges pores, la
membrane de filtration. Le godet permet de recevoir l’eau à analyser. Les deux parties doivent
s’assembler de manière solide par aimants, par caoutchoucs. Enfin, l’ensemble doit être
stérilisé à 170° C pendant 2h ou par un flambage à la flamme.
Figure n° 16: Dispositif de filtration