Chapitre II
matériels et méthodes
31
La température est équilibrée par un thermostat régulé. Ces échantillons sont incubés en
obscurité pendant 5 jours.
Lecture des résultats et multiplication par un coefficient (en relation avec le volume incubé)
2.4.1.8. La chlorophylle a
Le phytoplancton de l'eau de mer est en général évalué par la mesure de la chlorophylle
(chlorophylle a).
La méthode par spectrophotométrie consiste à filtrer un volume d’eau à travers un filtre. Le
filtre sera ensuite immergé dans un solvant qui assurera l’extraction des pigments, puis, on
mesure l’absorbance avant et après acidification de l’extrait (Aminot et Chaussepied, 1983).
Mode opératoire
Les échantillons d’eau (environ 500 ml) sont filtrés sur des disques filtrants en fibre de
verre (Wattman GF/F, diamètre 47 mm).
Chaque filtre est ensuite plié, mis dans du papier aluminium (portant le numéro de
l’échantillon et la date de prélèvement) et immédiatement congelé à –20° C.
L’extrait et le dosage de la chlorophylle a est réalisé selon la méthode de Lorenzen
(1967).
Avant la décongélation des filtres, l’extraction des pigments s’effectue dans des tubes
en verre contenant 10 ml d’acétone à 90%. Ces tubes sont recouverts par du papier
aluminium et sont immédiatement placés au réfrigérateur (environ 4° C) pendant 24
heures.
L’absorbance de l’extrait pigmentaire dans le solvant est ensuite estimée avant (A
na ) et
après acidification (A
a ) avec 10 μl d’acide chlorhydrique (HCl à 0,5 N).
Les lectures d’absorbances sont effectuées sur un spectrophotomètre aux longueurs
d’ondes 665 mm et 750 mm avant et après acidification.
Le calcul des concentrations de la chlorophylle a se fait à partir de l’équation de Lorenzen
(1967) :
[Chlorophylle a] (mg/m
3 ) =
na
a
26,7 (A 665 – A 665 ) . v
V.l
V : volume d’eau filtrée (l).
v : volume de solvant d’extraction (ml).
l : longueur du trajet optique de la cuve de mesure (cm).
na
A 665 : absorbance nette corrigée (avant acidification).
a
A 665 : absorbance nette corrigée (après acidification).
matériels et méthodes
31
La température est équilibrée par un thermostat régulé. Ces échantillons sont incubés en
obscurité pendant 5 jours.
Lecture des résultats et multiplication par un coefficient (en relation avec le volume incubé)
2.4.1.8. La chlorophylle a
Le phytoplancton de l'eau de mer est en général évalué par la mesure de la chlorophylle
(chlorophylle a).
La méthode par spectrophotométrie consiste à filtrer un volume d’eau à travers un filtre. Le
filtre sera ensuite immergé dans un solvant qui assurera l’extraction des pigments, puis, on
mesure l’absorbance avant et après acidification de l’extrait (Aminot et Chaussepied, 1983).
Mode opératoire
Les échantillons d’eau (environ 500 ml) sont filtrés sur des disques filtrants en fibre de
verre (Wattman GF/F, diamètre 47 mm).
Chaque filtre est ensuite plié, mis dans du papier aluminium (portant le numéro de
l’échantillon et la date de prélèvement) et immédiatement congelé à –20° C.
L’extrait et le dosage de la chlorophylle a est réalisé selon la méthode de Lorenzen
(1967).
Avant la décongélation des filtres, l’extraction des pigments s’effectue dans des tubes
en verre contenant 10 ml d’acétone à 90%. Ces tubes sont recouverts par du papier
aluminium et sont immédiatement placés au réfrigérateur (environ 4° C) pendant 24
heures.
L’absorbance de l’extrait pigmentaire dans le solvant est ensuite estimée avant (A
na ) et
après acidification (A
a ) avec 10 μl d’acide chlorhydrique (HCl à 0,5 N).
Les lectures d’absorbances sont effectuées sur un spectrophotomètre aux longueurs
d’ondes 665 mm et 750 mm avant et après acidification.
Le calcul des concentrations de la chlorophylle a se fait à partir de l’équation de Lorenzen
(1967) :
[Chlorophylle a] (mg/m
3 ) =
na
a
26,7 (A 665 – A 665 ) . v
V.l
V : volume d’eau filtrée (l).
v : volume de solvant d’extraction (ml).
l : longueur du trajet optique de la cuve de mesure (cm).
na
A 665 : absorbance nette corrigée (avant acidification).
a
A 665 : absorbance nette corrigée (après acidification).