Chapitre II
Matériels et méthodes
32
Mode opératoire
Introduire 250 ml dans un flacon brun en verre contenant un aimant d'agitation magnétique.
Mettre la pastille qui contient deux pastilles de soude (NaOH) dans la bouteille. L'agitation
est ensuite enclenchée par un dispositif adéquat. La température est équilibrée par un
thermostat réglé à 20° C. Les échantillons sont incubés en obscurité pendant cinq jours.
Lecture des résultats et multiplication par un coefficient (en relation avec le volume incubé)
(RODIER et al, 1996).
2.5. Mesure des paramètres microbiologiques
Les germes recherchés et dénombrés, sont les coliformes totaux, les coliformes fécaux, et les
Streptocoques fécaux. Ces germes sont peu ou pas pathogènes, ils sont révélateurs de
contamination fécale et entrainent par leur abondance la présomption de contamination plus
dangereuse (FIGARELLA et al., 2001).
2.5.1. Prélèvement et transport des échantillons
Au niveau du site étudié, les prélèvements d’eau de mer ont été réalisés durant 04 mois (mars,
avril, mai, juin) à raison d’un prélèvement par mois au niveau de 06 stations différentes.
Un examen bactériologique doit être effectué sur un échantillon correctement prélevé,
effectués à environs 30 cm de la surface en utilisant des flacons stériles, selon un mode
opératoire précis évitant toute contamination accidentelle, correctement transporté au
laboratoire et analysé après une courte durée de conservation dans les conditions satisfaisantes
(MAUL, 1997).
Les échantillons sont prélevés dans des flacons borosilicatés de 500 ml stérilisés à l’autoclave
à 120° C pendant 20 minutes. Les flacons sont ouverts, remplis et refermés sous l’eau pour
éviter toute contamination avec l’air.
Les échantillons sont transportés dans des glacières isothermes (4°c) à l’abri de la lumière.
Pour éviter les modifications de la teneur initiale, l’analyse doit se faire dans les 24 heures.
2.5.2. Le dénombrement bactérien
2.5.2.1. Dénombrement de la flore totale et les coliformes par la méthode de filtration
La méthode de filtration sur membrane consiste à recueillir sur une membrane stérile, en ester
de cellulose de 0.45µm de porosité, un volume donné (souvent 100 ml) d’échantillons et/ou
de dilution.
La membrane est ensuite déposée sur un milieu nutritif convenable; après incubation, les
colonies sont dénombrer et identifier et le résultat est exprimé en unité formant colonie UFC/x
ml. (CHAMPIAT et al., 1994).
Matériels et méthodes
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Mode opératoire
Introduire 250 ml dans un flacon brun en verre contenant un aimant d'agitation magnétique.
Mettre la pastille qui contient deux pastilles de soude (NaOH) dans la bouteille. L'agitation
est ensuite enclenchée par un dispositif adéquat. La température est équilibrée par un
thermostat réglé à 20° C. Les échantillons sont incubés en obscurité pendant cinq jours.
Lecture des résultats et multiplication par un coefficient (en relation avec le volume incubé)
(RODIER et al, 1996).
2.5. Mesure des paramètres microbiologiques
Les germes recherchés et dénombrés, sont les coliformes totaux, les coliformes fécaux, et les
Streptocoques fécaux. Ces germes sont peu ou pas pathogènes, ils sont révélateurs de
contamination fécale et entrainent par leur abondance la présomption de contamination plus
dangereuse (FIGARELLA et al., 2001).
2.5.1. Prélèvement et transport des échantillons
Au niveau du site étudié, les prélèvements d’eau de mer ont été réalisés durant 04 mois (mars,
avril, mai, juin) à raison d’un prélèvement par mois au niveau de 06 stations différentes.
Un examen bactériologique doit être effectué sur un échantillon correctement prélevé,
effectués à environs 30 cm de la surface en utilisant des flacons stériles, selon un mode
opératoire précis évitant toute contamination accidentelle, correctement transporté au
laboratoire et analysé après une courte durée de conservation dans les conditions satisfaisantes
(MAUL, 1997).
Les échantillons sont prélevés dans des flacons borosilicatés de 500 ml stérilisés à l’autoclave
à 120° C pendant 20 minutes. Les flacons sont ouverts, remplis et refermés sous l’eau pour
éviter toute contamination avec l’air.
Les échantillons sont transportés dans des glacières isothermes (4°c) à l’abri de la lumière.
Pour éviter les modifications de la teneur initiale, l’analyse doit se faire dans les 24 heures.
2.5.2. Le dénombrement bactérien
2.5.2.1. Dénombrement de la flore totale et les coliformes par la méthode de filtration
La méthode de filtration sur membrane consiste à recueillir sur une membrane stérile, en ester
de cellulose de 0.45µm de porosité, un volume donné (souvent 100 ml) d’échantillons et/ou
de dilution.
La membrane est ensuite déposée sur un milieu nutritif convenable; après incubation, les
colonies sont dénombrer et identifier et le résultat est exprimé en unité formant colonie UFC/x
ml. (CHAMPIAT et al., 1994).