Chapitre IV
Matériel et méthodes
- Peser chaque tube sans le faire exposer à la lumière puis les remettre au réfrigérateur ;
- Centrifuger les extraits dans une centrifugeuse à 06 postes (Annexe IV; figure 8),
comme suit :
- Ne sortir les tubes du réfrigérateur qu’en fonction de la capacité de la centrifugeuse et
selon leurs poids (d’une façon que chaque tube va être en face d’un autre d’un poids
voisin) ;
- Centrifuger les tubes durant 5min à 3500Tr/min puis pendant 10min à 4000Tr/min ;
- Transférer le surnageant de centrifugation dans la cuve de mesure en le prélevant par
aspiration lente (pipette, seringue, …). En veillant à ne pas prendre de fibres et non en
le transvasant directement.
2-6 Mesures des absorbances :
- A l’abri de la lumière, transférer dans la cuve assez de volume pour faire la
mesure dans le visible;
- Vérifier la propreté des faces de la cuve et la positionner correctement sur le portoir du
Spectrophotomètre lié à un ordinateur (Annexe IV; figure 7);
- Mesurer les abondances brutes de l’extrait non acidifié aux longueurs d’ondes de 665
et 750 nm : A
NA
665 brut et B
NA
brut ;
- Sortir la cuve et jouter directement 35 μL de l’acide chlorhydrique HCl 0,3N, boucher,
agiter et replacer précisément la cuve ;
- Laisser agir l’acide 3mn ;
- Mesurer à nouveau les absorbances brutes des extraits acidifiés à 665 et 750 nm :
A
A
665 brut et B
A
brut .
2-7 Calcul et expression des résultats :
- Corriger les absorbances brutes à 665 et 750 nm en soustrayant les blancs de cuve,
puis calculer les absorbances nettes à 665 nm avant et après acidification selon :
- Absorbance nette de l’échantillon non acidifié (NA):
-
…(3)
- Absorbance nette de l’échantillon acidifié (A):
…(4)
- Soient :
V : volume d’eau filtrée (L) ;
v : volume de solvant d’extraction (mL) ;
l : longueur du trajet optique de la cuve de mesure (cm) ;
- Calculer la Chlorophylle a selon :
Chlorophylle a (μg/l) = 27,7*(A
NA
665 - A
A
665 )* v / V*l.
A
A
665 = (A
A
665 brut - bc 665 ) – (B
A
brut - bc 750 ).
A
NA
665 = (A
NA
665 brut - bc 665 ) – (B
NA
brut - bc 750 ).
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Matériel et méthodes
- Peser chaque tube sans le faire exposer à la lumière puis les remettre au réfrigérateur ;
- Centrifuger les extraits dans une centrifugeuse à 06 postes (Annexe IV; figure 8),
comme suit :
- Ne sortir les tubes du réfrigérateur qu’en fonction de la capacité de la centrifugeuse et
selon leurs poids (d’une façon que chaque tube va être en face d’un autre d’un poids
voisin) ;
- Centrifuger les tubes durant 5min à 3500Tr/min puis pendant 10min à 4000Tr/min ;
- Transférer le surnageant de centrifugation dans la cuve de mesure en le prélevant par
aspiration lente (pipette, seringue, …). En veillant à ne pas prendre de fibres et non en
le transvasant directement.
2-6 Mesures des absorbances :
- A l’abri de la lumière, transférer dans la cuve assez de volume pour faire la
mesure dans le visible;
- Vérifier la propreté des faces de la cuve et la positionner correctement sur le portoir du
Spectrophotomètre lié à un ordinateur (Annexe IV; figure 7);
- Mesurer les abondances brutes de l’extrait non acidifié aux longueurs d’ondes de 665
et 750 nm : A
NA
665 brut et B
NA
brut ;
- Sortir la cuve et jouter directement 35 μL de l’acide chlorhydrique HCl 0,3N, boucher,
agiter et replacer précisément la cuve ;
- Laisser agir l’acide 3mn ;
- Mesurer à nouveau les absorbances brutes des extraits acidifiés à 665 et 750 nm :
A
A
665 brut et B
A
brut .
2-7 Calcul et expression des résultats :
- Corriger les absorbances brutes à 665 et 750 nm en soustrayant les blancs de cuve,
puis calculer les absorbances nettes à 665 nm avant et après acidification selon :
- Absorbance nette de l’échantillon non acidifié (NA):
-
…(3)
- Absorbance nette de l’échantillon acidifié (A):
…(4)
- Soient :
V : volume d’eau filtrée (L) ;
v : volume de solvant d’extraction (mL) ;
l : longueur du trajet optique de la cuve de mesure (cm) ;
- Calculer la Chlorophylle a selon :
Chlorophylle a (μg/l) = 27,7*(A
NA
665 - A
A
665 )* v / V*l.
A
A
665 = (A
A
665 brut - bc 665 ) – (B
A
brut - bc 750 ).
A
NA
665 = (A
NA
665 brut - bc 665 ) – (B
NA
brut - bc 750 ).
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