Chapitre IV
Matériel et méthodes
4.5 Mesure de la Chlorophylle a
1- Principe :
La mesure de la chlorophylle a est un indicateur de la biomasse phytoplanctonique du milieu
marin. Ce pigment est présent chez tous les organismes photosynthétiques aérobies ; il est
sensible à la lumière et peut être dégradé en présence d’acide (SOMLIT, 2015).
La mesure des pigments phytoplanctoniques repose sur leurs caractéristiques
spectroscopiques : absorption de lumière (spectrophotométrie) ou fluorescence (fluorimétrie).
Contenue dans les cellules, la chlorophylle a est un paramètre « particulaire » qui, pour une
mesure précise en laboratoire, nécessite la récolte du matériel en suspension par filtration,
suivie d'une extraction du filtre par solvant (Aminot et all, 2004).
2- La Spectrophotométrie selon Aminot et Kérouel, 2004 (Annexe V):
2-1 Echantillonnage et conservation :
- prélèvement à l’aide d’une bouteille Niskin et la conservation des échantillons dans des
flacons opaques de 1,5L dans des glacières jusqu'à l’arrivée au laboratoire pour une filtration
immédiate.
2-2 Filtration :
-
Au retour au laboratoire, la filtration des échantillons est effectuée à l’abri de la
lumière par une Rampe (Annexe IV; figure3) à 03 postes. En utilisant, les filtres de
0,7μm.
- Apres chaque échantillon rincer la rampe avec l’HCl à 0,1N puis avec l’eau distillée.
- Plier le filtre une première fois à l’aide de pinces, face chargée à l’intérieur.
- Plier une seconde fois le filtre et l’introduire dans un papier aluminium étiqueté.
- Congeler immédiatement.
2-3 Préparation du Blanc :
- Filtrer le même volume, que les échantillons, de l’eau distillée sur le même genre de
filtre ;
- Continuer en utilisant les mêmes étapes pour les échantillons.
2-4 Extraction :
- A l’abri de la lumière toujours ;
- Dans le tube prévu à cet usage (étiqueté), verser 5ml d’Acétone à 90% ;
- Déchiqueter le filtre dans le tube à l’aide d’une baguette ;
- Rajouter 5ml d’Acétone à 90% ;
- Boucher et agiter pour disperser les fibres ;
- Recouvrir par le papier aluminium utilisé pour la filtration ;
- Laisser l’extraction acétonique se poursuivre une nuit au réfrigérateur.
2-5 Centrifugation et transfert de l’extrait préalables à la mesure spectroscopique :
55
Matériel et méthodes
4.5 Mesure de la Chlorophylle a
1- Principe :
La mesure de la chlorophylle a est un indicateur de la biomasse phytoplanctonique du milieu
marin. Ce pigment est présent chez tous les organismes photosynthétiques aérobies ; il est
sensible à la lumière et peut être dégradé en présence d’acide (SOMLIT, 2015).
La mesure des pigments phytoplanctoniques repose sur leurs caractéristiques
spectroscopiques : absorption de lumière (spectrophotométrie) ou fluorescence (fluorimétrie).
Contenue dans les cellules, la chlorophylle a est un paramètre « particulaire » qui, pour une
mesure précise en laboratoire, nécessite la récolte du matériel en suspension par filtration,
suivie d'une extraction du filtre par solvant (Aminot et all, 2004).
2- La Spectrophotométrie selon Aminot et Kérouel, 2004 (Annexe V):
2-1 Echantillonnage et conservation :
- prélèvement à l’aide d’une bouteille Niskin et la conservation des échantillons dans des
flacons opaques de 1,5L dans des glacières jusqu'à l’arrivée au laboratoire pour une filtration
immédiate.
2-2 Filtration :
-
Au retour au laboratoire, la filtration des échantillons est effectuée à l’abri de la
lumière par une Rampe (Annexe IV; figure3) à 03 postes. En utilisant, les filtres de
0,7μm.
- Apres chaque échantillon rincer la rampe avec l’HCl à 0,1N puis avec l’eau distillée.
- Plier le filtre une première fois à l’aide de pinces, face chargée à l’intérieur.
- Plier une seconde fois le filtre et l’introduire dans un papier aluminium étiqueté.
- Congeler immédiatement.
2-3 Préparation du Blanc :
- Filtrer le même volume, que les échantillons, de l’eau distillée sur le même genre de
filtre ;
- Continuer en utilisant les mêmes étapes pour les échantillons.
2-4 Extraction :
- A l’abri de la lumière toujours ;
- Dans le tube prévu à cet usage (étiqueté), verser 5ml d’Acétone à 90% ;
- Déchiqueter le filtre dans le tube à l’aide d’une baguette ;
- Rajouter 5ml d’Acétone à 90% ;
- Boucher et agiter pour disperser les fibres ;
- Recouvrir par le papier aluminium utilisé pour la filtration ;
- Laisser l’extraction acétonique se poursuivre une nuit au réfrigérateur.
2-5 Centrifugation et transfert de l’extrait préalables à la mesure spectroscopique :
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