Chapitre IV
Matériel et méthodes
Définition de la colorimétrie :
Cette méthode est l'une des méthodes de dosage chimique des sels nutritifs basée sur
l'absorption de la lumière par la solution analysée. Elle est appelée aussi photométrie ou
absorptiomètre. La colorimétrie est basée sur la loi de Beer-Lambert qui est définit comme
suit :
…(2)
L’absorption et la transmission sont deux phénomènes auxquels est soumise une substance
d’épaisseur (L) traversée par un faisceau lumineux monochromatique. Les quantités de
lumières absorbées (Absorbance) et transmise (transmission) obéissent à la loi de BeerLambert.
Où :
I0, I : est l’intensité lumineuse incidente et émergente du milieu absorbant.
A : est l’absorbance ou densité optique.
ε: est le coefficient d’extinction moléculaire.
L : est le trajet optique (épaisseur du milieu absorbant).
C : est la concentration du milieu absorbant.
Principe général :
Le principe de dosage des sels nutritifs est basé sur une réaction de coloration. En effet ces
sels réagissent dans certaines conditions (T°C, pH, Catalyseur …) avec des réactifs
spécifiques pour donner naissance à une coloration absorbant la lumière à une certaine
longueur d’ondes (λ). L’absorption de l’énergie lumineuse dépend de l’intensité de la
coloration, de même cette dernière est de temps plus important que la solution est concentrée
en sel dosé.
Matériel utilisé :
Auto-Analyzer SAN plus System de marque SKALAR®, 1998.
Bi-distillateur MILLI-Q® Reagent Water System.
Des micropipettes Fortuna ® avec éjecteur d’embouts de type DIGITAL , une de 200 à
1000μl et l’autre de 20 à 250 μL, ainsi que des fioles de 100 et 500 mL.
Balance, Spatule, entonnoir, bécher et la hôte.
Etalonnage :
Cette opération nécessite la préparation pour chacun des éléments à analyser une solution
mère et une solution fille. Pour chacune de ces solutions filles, on réalise une série de six
étalons couvrant la gamme de la concentration des échantillons (Annexe III) rencontrée
habituellement dans l’eau de mer.
Les droites d’étalonnage (Annexe III) sont établies automatiquement par le logiciel en
utilisant les concentrations connus des solutions étalons et leurs hauteurs de pic
correspondantes. L’eau bi-distillée et les réactifs sont pris comme référence pour la
construction de ligne de base.
A = DO =log Io/I = ε.L.C
54
Matériel et méthodes
Définition de la colorimétrie :
Cette méthode est l'une des méthodes de dosage chimique des sels nutritifs basée sur
l'absorption de la lumière par la solution analysée. Elle est appelée aussi photométrie ou
absorptiomètre. La colorimétrie est basée sur la loi de Beer-Lambert qui est définit comme
suit :
…(2)
L’absorption et la transmission sont deux phénomènes auxquels est soumise une substance
d’épaisseur (L) traversée par un faisceau lumineux monochromatique. Les quantités de
lumières absorbées (Absorbance) et transmise (transmission) obéissent à la loi de BeerLambert.
Où :
I0, I : est l’intensité lumineuse incidente et émergente du milieu absorbant.
A : est l’absorbance ou densité optique.
ε: est le coefficient d’extinction moléculaire.
L : est le trajet optique (épaisseur du milieu absorbant).
C : est la concentration du milieu absorbant.
Principe général :
Le principe de dosage des sels nutritifs est basé sur une réaction de coloration. En effet ces
sels réagissent dans certaines conditions (T°C, pH, Catalyseur …) avec des réactifs
spécifiques pour donner naissance à une coloration absorbant la lumière à une certaine
longueur d’ondes (λ). L’absorption de l’énergie lumineuse dépend de l’intensité de la
coloration, de même cette dernière est de temps plus important que la solution est concentrée
en sel dosé.
Matériel utilisé :
Auto-Analyzer SAN plus System de marque SKALAR®, 1998.
Bi-distillateur MILLI-Q® Reagent Water System.
Des micropipettes Fortuna ® avec éjecteur d’embouts de type DIGITAL , une de 200 à
1000μl et l’autre de 20 à 250 μL, ainsi que des fioles de 100 et 500 mL.
Balance, Spatule, entonnoir, bécher et la hôte.
Etalonnage :
Cette opération nécessite la préparation pour chacun des éléments à analyser une solution
mère et une solution fille. Pour chacune de ces solutions filles, on réalise une série de six
étalons couvrant la gamme de la concentration des échantillons (Annexe III) rencontrée
habituellement dans l’eau de mer.
Les droites d’étalonnage (Annexe III) sont établies automatiquement par le logiciel en
utilisant les concentrations connus des solutions étalons et leurs hauteurs de pic
correspondantes. L’eau bi-distillée et les réactifs sont pris comme référence pour la
construction de ligne de base.
A = DO =log Io/I = ε.L.C
54