Chapitre II : Matériels et Méthodes
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Le dosage de protéines par la méthode de Bradford utilise le réactif éponyme, dont le
constituant principal est le bleu de Coomasie. Sous sa forme cationique libre, ce réactif
absorbe la lumière à une longueur d’onde de 465 nm. Lorsqu’il est mis en contact avec
une solution protéique à doser, il se lie aux protéines présentes et aux groupements
aromatiques ce qui a pour effet de déplacer sa principale raie d’absorption à 595 nm.
L’absorbance du rayonnement visible à 595nm est mesurée par un détecteur, et permet de
doser indirectement la teneur en protéine de la solution à l’aide d’une courbe d’étalonnage
en BSA
Préparation du réactif de Bradford : diluer le réactif de Bradford au 1/10
Préparation de la gamme étalon BSA (Bovine Serum Albumin) :
- préparer une solution mère de BSA (1mg /ml)
- préparer une gamme de BSA de 0 à100 µg
-ajouter le réactif de Bradford
Préparation de l’échantillon
- 25g de la chair est additionnée de 225ml de solvant, le tout est finement broyé.
- En même temps que la préparation de la gamme étalon, une série de tubes, contenant
différents volumes de prise d'essai de l’échantillon à doser, est préparée.
Lecture :
- lire les absorbances à 595 nm
-déterminer la concentration des échantillons en protéine en utilisant la courbe
étalon
II.3.3. Dosage des lipides totaux par la méthode de Soxhlet (1879)
Les lipides sont insolubles dans l’eau et très solubles dans les solvants organiques, tel que
l’éther éthylique. La plupart des méthodes de dosage des lipides exploitent ces propriétés
physiques pour extraire les lipides des aliments dans le but de mesurer leurs concentrations.
L’extraction des lipides totaux est réalisée par la méthode de Soxhlet.
présentation de la méthode :
La méthode Soxhlet est la méthode de référence utilisée pour la détermination de la matière
grasse dans les aliments solides déshydratés. C’est une méthode gravimétrique, puisqu’on
pèse l’échantillon au début et la matière grasse à la fin de l’extraction.
principe de la méthode :
L’aliment solide est pesé et placé dans une capsule de cellulose. L’échantillon est extrait en
continu par l’éther éthylique à ébullition (T =35°C) qui dissout graduellement la matière
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Le dosage de protéines par la méthode de Bradford utilise le réactif éponyme, dont le
constituant principal est le bleu de Coomasie. Sous sa forme cationique libre, ce réactif
absorbe la lumière à une longueur d’onde de 465 nm. Lorsqu’il est mis en contact avec
une solution protéique à doser, il se lie aux protéines présentes et aux groupements
aromatiques ce qui a pour effet de déplacer sa principale raie d’absorption à 595 nm.
L’absorbance du rayonnement visible à 595nm est mesurée par un détecteur, et permet de
doser indirectement la teneur en protéine de la solution à l’aide d’une courbe d’étalonnage
en BSA
Préparation du réactif de Bradford : diluer le réactif de Bradford au 1/10
Préparation de la gamme étalon BSA (Bovine Serum Albumin) :
- préparer une solution mère de BSA (1mg /ml)
- préparer une gamme de BSA de 0 à100 µg
-ajouter le réactif de Bradford
Préparation de l’échantillon
- 25g de la chair est additionnée de 225ml de solvant, le tout est finement broyé.
- En même temps que la préparation de la gamme étalon, une série de tubes, contenant
différents volumes de prise d'essai de l’échantillon à doser, est préparée.
Lecture :
- lire les absorbances à 595 nm
-déterminer la concentration des échantillons en protéine en utilisant la courbe
étalon
II.3.3. Dosage des lipides totaux par la méthode de Soxhlet (1879)
Les lipides sont insolubles dans l’eau et très solubles dans les solvants organiques, tel que
l’éther éthylique. La plupart des méthodes de dosage des lipides exploitent ces propriétés
physiques pour extraire les lipides des aliments dans le but de mesurer leurs concentrations.
L’extraction des lipides totaux est réalisée par la méthode de Soxhlet.
présentation de la méthode :
La méthode Soxhlet est la méthode de référence utilisée pour la détermination de la matière
grasse dans les aliments solides déshydratés. C’est une méthode gravimétrique, puisqu’on
pèse l’échantillon au début et la matière grasse à la fin de l’extraction.
principe de la méthode :
L’aliment solide est pesé et placé dans une capsule de cellulose. L’échantillon est extrait en
continu par l’éther éthylique à ébullition (T =35°C) qui dissout graduellement la matière