Chapitre II : Matériels et Méthodes
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Figure 12: Broyeur Stomacher et Dilution mère (10
-1 ) et deux dilutions successives
a. Recherche et dénombrement de la flore mésophile aérobie totale
- Définition
La flore mésophile aérobie totale est l'ensemble des micro-organismes aptes à se multiplier à
l'air aux températures moyennes, plus précisément ceux dont la température optimale de
croissance est située entre 25 et 40°C. Ils peuvent être des micro-organismes pathogènes ou
d’altération. L’étude de la flore totale est donc un outil permettant de garantir une certaine
sécurité hygiénique et un certain niveau organoleptique.
- Mode opératoire
Le milieu Plate Count Agar (PCA) est la gélose standard habituellement utilisée pour le
dénombrement de cette flore.
On transfère aseptiquement 1 ml de suspension de chaque tube des dilutions 10
-1 et 10
-2 dans
les boites de pétri stériles. Le milieu PCA, fondu et refroidi au bain-marie à 45°C, est ajouté à
l’inoculum à raison de 12 à 15 ml par boite. Ensuite, on homogénéise le mélange par des
mouvements rotatifs. Après solidification, une deuxième couche de 5 à7 ml de PCA est
ajoutée. Cette deuxième couche résulte de la faible sélectivité du PCA. Elle permet d’éviter
l’envahissement de la boite par des germes comme Proteus, qui rendraient la lecture difficile.
Les boites ayant la gélose solidifiée sont ensuite incubées, couvercles tournés vers la clayette
de l’étuve à 30°C pendant 72 heures.
On dénombre toutes les colonies ayant poussé entre les deux couches à l’aide d’un compteur
de colonies muni d’une loupe ou à l’œil nu. La lecture se fait sur 2 boites ensemencées avec
des dilutions successives. Le nombre de germes par gramme (N) de produit est obtenu selon
la formule suivante :