Matériel et méthodes
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II.5.6. Mesure du degré de désacétylation par résonance magnétique nucléaire RMN H 1
La mesure du degré de désacétylation par RMN du proton (RMN H
1 ) se fait par la méthode
proposée par (KASAAI, 2010).
L’échantillon à analyser est préparé par dissolution de 5 mg de chitosane dans 0.5 ml d’une
solution à 2% en masse de DCl dans D2O. Les spectres RMN sont enregistrés sur un
spectromètre BRUKER Avance 250 MHz à 70°C (AUDAT, 2013).
Le DDA est évalué à partir de l’intégration des intensités des pics correspondant au
groupement méthyle de la N-acétyleglucosamide et de celle des protons H2 à H6 selon
l’équation ci-dessous (HIRAI et al,1991).
DDA = [1- (1/3 x IHAc) / (1/6 x I (H2-H6))] *100
(II.5.6)
Avec :
- IHAc est l’intensité intégrale du pic correspondant aux protons du groupement acétyle.
- I (H2-H6) est la somme des intensités intégrées des protons H2, H3, H4, H5 et H6
II.6. Etude du pouvoir antibactérien (anti Legionella pneumophila) du chitosane
II.6.1. Revivification de la souche
II.6.1.1. Préparation du milieu de culture
Avant d’entamer la revivification de la souche, il est primordial de préparer le milieu de
culture spécifique, cette tâche revient, cependant, aux spécialistes de l’institut Pasteur. Il
suffira en suite de faire fondre le milieu de base pour légionelles et d’y ajouter le supplément
de croissance (BCYE : riche en cystéine qui est indispensable à la croissance des légionelles)
et le supplément sélectif (GVPC : antibiotiques qui serviront à inhiber la croissance des autres
germes) après avoir mélangé les composants ; il suffira ensuite de couler les boites qui seront
par la suite ensemencées et utilisées pour les expérimentations (Figures 15 et 16).
Figure 15. Séchage du milieu de culture.
Figure 16. Le supplément de croissance et
le supplément sélectif.
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II.5.6. Mesure du degré de désacétylation par résonance magnétique nucléaire RMN H 1
La mesure du degré de désacétylation par RMN du proton (RMN H
1 ) se fait par la méthode
proposée par (KASAAI, 2010).
L’échantillon à analyser est préparé par dissolution de 5 mg de chitosane dans 0.5 ml d’une
solution à 2% en masse de DCl dans D2O. Les spectres RMN sont enregistrés sur un
spectromètre BRUKER Avance 250 MHz à 70°C (AUDAT, 2013).
Le DDA est évalué à partir de l’intégration des intensités des pics correspondant au
groupement méthyle de la N-acétyleglucosamide et de celle des protons H2 à H6 selon
l’équation ci-dessous (HIRAI et al,1991).
DDA = [1- (1/3 x IHAc) / (1/6 x I (H2-H6))] *100
(II.5.6)
Avec :
- IHAc est l’intensité intégrale du pic correspondant aux protons du groupement acétyle.
- I (H2-H6) est la somme des intensités intégrées des protons H2, H3, H4, H5 et H6
II.6. Etude du pouvoir antibactérien (anti Legionella pneumophila) du chitosane
II.6.1. Revivification de la souche
II.6.1.1. Préparation du milieu de culture
Avant d’entamer la revivification de la souche, il est primordial de préparer le milieu de
culture spécifique, cette tâche revient, cependant, aux spécialistes de l’institut Pasteur. Il
suffira en suite de faire fondre le milieu de base pour légionelles et d’y ajouter le supplément
de croissance (BCYE : riche en cystéine qui est indispensable à la croissance des légionelles)
et le supplément sélectif (GVPC : antibiotiques qui serviront à inhiber la croissance des autres
germes) après avoir mélangé les composants ; il suffira ensuite de couler les boites qui seront
par la suite ensemencées et utilisées pour les expérimentations (Figures 15 et 16).
Figure 15. Séchage du milieu de culture.
Figure 16. Le supplément de croissance et
le supplément sélectif.