CHAPITRE IV
Matériel & Méthodes
100
IV.8.2 Test de la catalase.
IV.8.2.1 Principe.
La catalase est une enzyme contenant du fer, qui catalyse la décomposition du peroxyde
d’hydrogène (H 2 O 2 ) en eau et en oxygène.
Synthétisée par la plupart des bactéries aérobies, elle élimine le peroxyde d’hydrogène produit
au cours du métabolisme aérobie. Le test de la catalase sert à détecter la production de cette
enzyme par une souche bactérienne donnée (Singleton, 1999).
IV.8.2.2 Technique :
• On dépose à l’aide d’une pipette Pasteur stérile une goutte d’eau oxygénée à 10% au
centre d’une lame propre et dégraissée.
• On prélève avec une pipette Pasteur stérile une colonie bactérienne.
• On resuspend la colonie dans la goutte d’eau oxygénée.
Lecture : Un dégagement gazeux abondant sous forme de mousse ou de bulles traduit la
décomposition de l’eau oxygénée en oxygène gazeux sous l’action de la catalase (Guiraud,
1998).
IV.8.3 Test d’oxydase.
IV.8.3.1 Principe.
Le test de l’oxydase détecte un type particulier de chaîne respiratoire, qui comporte en fin de
chaîne un cytochrome c et l’oxydase associée. Les bactéries qui possèdent une telle chaîne
peuvent oxyder des composés chimiques (N-N dimethyl-p-phenylenediamine). Les électrons
sont transférés de ce réactif au cytochrome c et de là, via l’oxydase, à l’oxygène. Ainsi oxydé,
le réactif développe une couleur violette intense (Singleton, 1999).
IV.8.3.2 Technique.
• On dépose stérilement le disque d’oxydase au centre d’une lame propre.
• On humidifie le disque d’oxydase par une goutte d’eau distillée stérile.
• On prélève une colonie bactérienne (culture fraiche) recueillie sur gélose avec une
pipette Pasteur et on l’étale sur le disque.
Lecture : Les espèces oxydase-positives donnent une coloration beu/violette dans les 10
secondes (Singleton, 1999).
Matériel & Méthodes
100
IV.8.2 Test de la catalase.
IV.8.2.1 Principe.
La catalase est une enzyme contenant du fer, qui catalyse la décomposition du peroxyde
d’hydrogène (H 2 O 2 ) en eau et en oxygène.
Synthétisée par la plupart des bactéries aérobies, elle élimine le peroxyde d’hydrogène produit
au cours du métabolisme aérobie. Le test de la catalase sert à détecter la production de cette
enzyme par une souche bactérienne donnée (Singleton, 1999).
IV.8.2.2 Technique :
• On dépose à l’aide d’une pipette Pasteur stérile une goutte d’eau oxygénée à 10% au
centre d’une lame propre et dégraissée.
• On prélève avec une pipette Pasteur stérile une colonie bactérienne.
• On resuspend la colonie dans la goutte d’eau oxygénée.
Lecture : Un dégagement gazeux abondant sous forme de mousse ou de bulles traduit la
décomposition de l’eau oxygénée en oxygène gazeux sous l’action de la catalase (Guiraud,
1998).
IV.8.3 Test d’oxydase.
IV.8.3.1 Principe.
Le test de l’oxydase détecte un type particulier de chaîne respiratoire, qui comporte en fin de
chaîne un cytochrome c et l’oxydase associée. Les bactéries qui possèdent une telle chaîne
peuvent oxyder des composés chimiques (N-N dimethyl-p-phenylenediamine). Les électrons
sont transférés de ce réactif au cytochrome c et de là, via l’oxydase, à l’oxygène. Ainsi oxydé,
le réactif développe une couleur violette intense (Singleton, 1999).
IV.8.3.2 Technique.
• On dépose stérilement le disque d’oxydase au centre d’une lame propre.
• On humidifie le disque d’oxydase par une goutte d’eau distillée stérile.
• On prélève une colonie bactérienne (culture fraiche) recueillie sur gélose avec une
pipette Pasteur et on l’étale sur le disque.
Lecture : Les espèces oxydase-positives donnent une coloration beu/violette dans les 10
secondes (Singleton, 1999).