CHAPITRE IV
Matériel & Méthodes
99
IV.7 Caractérisations morphologiques des bactéries isolées.
Le caractère morphologique est un critère d’orientation très important de l’identification
bactérienne (Marchal et al., 1988). Les observations suivantes ont été réalisées :
Aspect des colonies bactériennes isolées (Marchal et al., 1988):
• Taille : petites colonies lorsque le diamètre est égal ou inférieur à 1 mm, colonies
moyennes lorsque le diamètre est compris entre 1,5 et 3 mm, grandes colonies lorsque
le diamètre est supérieur à 3 mm.
• Allure des contours : bords lisses réguliers, irréguliers, déchiquetés pouvant même
présenter parfois des prolongements, l’envahissement des milieux en vague.
• Forme du relief : colonies bombées, demi-bombées, plates, le centre surélevé ou
ombiliqué.
• Transparence : colonies transparentes, translucides, lactescentes, opaques.
• Aspect de la surface : colonies lisses, rugueuses, muqueuses.
• Pigmentation : colonies rouges, orangées, jaunes, blanches, ocres.
IV.8 Caractérisations biochimiques des bactéries isolées.
IV.8.1 Coloration de Gram.
C’est un test qui permet la distinction entre deux groupes bactériens, les Gram + et les GramLe mécanisme de cette coloration est connu. Le violet de gentiane se fixe sur des composants
cytoplasmiques et après un temps de coloration, toutes les bactéries sont violettes. Chez les
bactéries à Gram négatif, la paroi, riche en lipides, laisse passer l'alcool (ou le mélange alcool
+ acétone) qui décolore le cytoplasme alors que, chez les bactéries à Gram positif, la paroi
constitue une barrière imperméable à l'alcool et le cytoplasme demeure coloré en violet.
Un frottis fixé à la chaleur est coloré pendant une minute avec une solution de violet de
gentiane, le frottis coloré est rincé rapidement avec une solution iodo-ioduré de Lugol, et il y
est maintenu pendant une minute. Le frottis est ensuite décoloré avec l’alcool à 95 % pendant
quelques secondes jusqu'à élimination de l’excès du colorant puis rincé immédiatement avec
l’eau du robinet. Le frottis est ensuite traité avec un colorant qui est une solution de Fushine,
rincé rapidement au robinet et séché. Après ce traitement, La lame est examinée au
microscope optique (objectif 100 X sous immersion). Les cellules Gram négatif apparaissent
roses et les cellules Gram positif apparaissent sous une couleur violette (Singleton et
Sainsbury, 1984).
Matériel & Méthodes
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IV.7 Caractérisations morphologiques des bactéries isolées.
Le caractère morphologique est un critère d’orientation très important de l’identification
bactérienne (Marchal et al., 1988). Les observations suivantes ont été réalisées :
Aspect des colonies bactériennes isolées (Marchal et al., 1988):
• Taille : petites colonies lorsque le diamètre est égal ou inférieur à 1 mm, colonies
moyennes lorsque le diamètre est compris entre 1,5 et 3 mm, grandes colonies lorsque
le diamètre est supérieur à 3 mm.
• Allure des contours : bords lisses réguliers, irréguliers, déchiquetés pouvant même
présenter parfois des prolongements, l’envahissement des milieux en vague.
• Forme du relief : colonies bombées, demi-bombées, plates, le centre surélevé ou
ombiliqué.
• Transparence : colonies transparentes, translucides, lactescentes, opaques.
• Aspect de la surface : colonies lisses, rugueuses, muqueuses.
• Pigmentation : colonies rouges, orangées, jaunes, blanches, ocres.
IV.8 Caractérisations biochimiques des bactéries isolées.
IV.8.1 Coloration de Gram.
C’est un test qui permet la distinction entre deux groupes bactériens, les Gram + et les GramLe mécanisme de cette coloration est connu. Le violet de gentiane se fixe sur des composants
cytoplasmiques et après un temps de coloration, toutes les bactéries sont violettes. Chez les
bactéries à Gram négatif, la paroi, riche en lipides, laisse passer l'alcool (ou le mélange alcool
+ acétone) qui décolore le cytoplasme alors que, chez les bactéries à Gram positif, la paroi
constitue une barrière imperméable à l'alcool et le cytoplasme demeure coloré en violet.
Un frottis fixé à la chaleur est coloré pendant une minute avec une solution de violet de
gentiane, le frottis coloré est rincé rapidement avec une solution iodo-ioduré de Lugol, et il y
est maintenu pendant une minute. Le frottis est ensuite décoloré avec l’alcool à 95 % pendant
quelques secondes jusqu'à élimination de l’excès du colorant puis rincé immédiatement avec
l’eau du robinet. Le frottis est ensuite traité avec un colorant qui est une solution de Fushine,
rincé rapidement au robinet et séché. Après ce traitement, La lame est examinée au
microscope optique (objectif 100 X sous immersion). Les cellules Gram négatif apparaissent
roses et les cellules Gram positif apparaissent sous une couleur violette (Singleton et
Sainsbury, 1984).