CHAPITRE IV
Matériel & Méthodes
95
Tableau 13. Composition des deux solutions du gel polyacrylamide (8%)
Réactifs
Solution A (70%)
Solution B (35%)
Acril/Bis (30%)
6,13 ml
6,13 ml
TAE 50X (Tris 2M, Acetate
1M, EDTA 50 mM)
0,46 ml
0,46 ml
Formamide
6,44 ml
3,22 ml
Urée
6,76 g
3,38 g
Glycérol
0,46 ml
0,46 ml
Eau distillée
Compléter jusqu’à 23 ml
Compléter jusqu’à 23 ml
APS (10%)
83,63 µl
83,63 µl
TEMED
15,68 µl
15,68 µl
L'une de ces chambres (cylindre droit) est munie d'une deuxième vanne qui est reliée aux
plaques de verre par l'intermédiaire d'un robinet connecté à une tubulure. Celle-ci est engagée
dans les galets d'une pompe péristaltique qui assurera le pompage de la solution d'acrylamide
jusqu'aux plaques. Après avoir initié la polymérisation dans chaque cuve, on actionne
simultanément le robinet et la pompe ; les solutions d'acrylamide de concentration différentes
en dénaturant se mélangent dans la cuve droite. Le liquide progresse à une vitesse d'environ 4
ml/mn qui, sans perturber le gradient, est suffisamment rapide pour éviter une polymérisation
complète dans la tubulure. Le gel est prêt à l'emploi une heure environ après avoir été coulé
(figure 36).
Figure 36. Images représentant le dispositif de préparation du gradient dénaturant (à gauche)
et les plaques de verre (A droite)
Matériel & Méthodes
95
Tableau 13. Composition des deux solutions du gel polyacrylamide (8%)
Réactifs
Solution A (70%)
Solution B (35%)
Acril/Bis (30%)
6,13 ml
6,13 ml
TAE 50X (Tris 2M, Acetate
1M, EDTA 50 mM)
0,46 ml
0,46 ml
Formamide
6,44 ml
3,22 ml
Urée
6,76 g
3,38 g
Glycérol
0,46 ml
0,46 ml
Eau distillée
Compléter jusqu’à 23 ml
Compléter jusqu’à 23 ml
APS (10%)
83,63 µl
83,63 µl
TEMED
15,68 µl
15,68 µl
L'une de ces chambres (cylindre droit) est munie d'une deuxième vanne qui est reliée aux
plaques de verre par l'intermédiaire d'un robinet connecté à une tubulure. Celle-ci est engagée
dans les galets d'une pompe péristaltique qui assurera le pompage de la solution d'acrylamide
jusqu'aux plaques. Après avoir initié la polymérisation dans chaque cuve, on actionne
simultanément le robinet et la pompe ; les solutions d'acrylamide de concentration différentes
en dénaturant se mélangent dans la cuve droite. Le liquide progresse à une vitesse d'environ 4
ml/mn qui, sans perturber le gradient, est suffisamment rapide pour éviter une polymérisation
complète dans la tubulure. Le gel est prêt à l'emploi une heure environ après avoir été coulé
(figure 36).
Figure 36. Images représentant le dispositif de préparation du gradient dénaturant (à gauche)
et les plaques de verre (A droite)