CHAPITRE IV
Matériel & Méthodes
93
• Charger 5 µl de marqueur de poids moléculaires (100 pb DNA ladder, Thermo Fisher
Scientific, Milan, Italie) ;
• Appliquer une différence de potentiel (100V pendant 30 min) ;
• L’ADN chargé négativement à pH basique va migrer vers l’électrode positive.
Figure 34. Principe de l’électrophorèse en gel d’agarose
Après électrophorèse l’ADN est visualisé par transillumintation aux U.V. (312 nm). Le
bromure d’éthidium qui s’est intercalé entre les bases de l’ADN absorbe la lumière dans les
UV et la réémet dans l’orange. Les produits de PCR apparaissent donc sous UV et le
marqueur de poids moléculaire permet de déterminer la taille des fragments. En effet, il existe
une relation inverse entre la distance de migration et le logarithme de la taille des fragments.
Un fragment de 190 bp est attendu (figure 35).
Matériel & Méthodes
93
• Charger 5 µl de marqueur de poids moléculaires (100 pb DNA ladder, Thermo Fisher
Scientific, Milan, Italie) ;
• Appliquer une différence de potentiel (100V pendant 30 min) ;
• L’ADN chargé négativement à pH basique va migrer vers l’électrode positive.
Figure 34. Principe de l’électrophorèse en gel d’agarose
Après électrophorèse l’ADN est visualisé par transillumintation aux U.V. (312 nm). Le
bromure d’éthidium qui s’est intercalé entre les bases de l’ADN absorbe la lumière dans les
UV et la réémet dans l’orange. Les produits de PCR apparaissent donc sous UV et le
marqueur de poids moléculaire permet de déterminer la taille des fragments. En effet, il existe
une relation inverse entre la distance de migration et le logarithme de la taille des fragments.
Un fragment de 190 bp est attendu (figure 35).