Chapitre II : Matériel et méthodes
42
II.4.1. Prélèvement pour l’analyse
Les parties superficielles et profondes des poissons fumés ont été prélevées à l’aide de
couteaux et de pinces stériles à proximité du bec bunsen allumé. Cette opération consiste à
prélever de manière aseptique, une fraction de la chair des poissons fumés choisis au hasard
jusqu’à obtenir un poids de 25 g. la fraction ainsi prélevée est utilisée pour la préparation de la
solution- mère.
II.4.2. Préparation de la solution mère et des dilutions décimales
II.4.2.1. Mode opératoire
Préparation de la solution mère : 10
-1
Sur une payasse bien stérile et devant un bec bensun on introduit 25g de chaire d’allache dans
un mixeur stérile et inoxydable avec 225ml d’eau physiologique après homogénéisation
pendent quelques minutes, on récupère la solution (DM) dont la dilution est de 1/10 ou 10
-1
dans une bouteille stérile.
Préparation des solutions fille : 10
-2 / 10
-3
Dans un tube à vis stérile contenant au préalable 9 ml d’eau physiologique on introduit 1ml de
solution mère (DM) a l’aide d’une pipette graduée stérile puis on mélange soigneusement
pour homogénéiser ainsi on obtient une dilution de 1/100 ou 10
-2.
Prélever 1ml de la dilution 10
-2
à l’aide d’une autre pipette stérile, l’introduire dans un tube à
vis aussi stérile contenant 9ml d’eau physiologique, mélanger soigneusement et on obtient la
deuxième solution fille dont la dilution est de 10
-3 .
II.4.3. Recherche et dénombrement de la Flore Mésophile Aérobie Totale
La Flore Mésophile Aérobie Totale (FMAT) est un indicateur sanitaire qui permet d'évaluer le
nombre d'UFC (Unité Formant une Colonie) présentes dans un produit ou sur une surface
dans le but de déterminer l’état de fraicheur d’un produit ou l’efficacité d’un traitement
thermique ou de la conservation cette recherche est donc un outil permettant de garantir une
certaine sécurité hygiénique et un certain niveau organoleptique. Ce dénombrement se fait à
30°C pendant 72 h d’incubation dans un milieu de culture bien défini.
Mode opératoire
A partir des dilutions effectuées et à l’aide d’une pipette pasteur stérile, porter aseptiquement
1ml dans une boite de pétrie contenant de la gélose PCA (Plat Count Agar) et répartir en
dessinant un huit pour permettre à l’inoculum de se mélanger a la gélose puis incuber à 30°C
pendant 72h.
42
II.4.1. Prélèvement pour l’analyse
Les parties superficielles et profondes des poissons fumés ont été prélevées à l’aide de
couteaux et de pinces stériles à proximité du bec bunsen allumé. Cette opération consiste à
prélever de manière aseptique, une fraction de la chair des poissons fumés choisis au hasard
jusqu’à obtenir un poids de 25 g. la fraction ainsi prélevée est utilisée pour la préparation de la
solution- mère.
II.4.2. Préparation de la solution mère et des dilutions décimales
II.4.2.1. Mode opératoire
Préparation de la solution mère : 10
-1
Sur une payasse bien stérile et devant un bec bensun on introduit 25g de chaire d’allache dans
un mixeur stérile et inoxydable avec 225ml d’eau physiologique après homogénéisation
pendent quelques minutes, on récupère la solution (DM) dont la dilution est de 1/10 ou 10
-1
dans une bouteille stérile.
Préparation des solutions fille : 10
-2 / 10
-3
Dans un tube à vis stérile contenant au préalable 9 ml d’eau physiologique on introduit 1ml de
solution mère (DM) a l’aide d’une pipette graduée stérile puis on mélange soigneusement
pour homogénéiser ainsi on obtient une dilution de 1/100 ou 10
-2.
Prélever 1ml de la dilution 10
-2
à l’aide d’une autre pipette stérile, l’introduire dans un tube à
vis aussi stérile contenant 9ml d’eau physiologique, mélanger soigneusement et on obtient la
deuxième solution fille dont la dilution est de 10
-3 .
II.4.3. Recherche et dénombrement de la Flore Mésophile Aérobie Totale
La Flore Mésophile Aérobie Totale (FMAT) est un indicateur sanitaire qui permet d'évaluer le
nombre d'UFC (Unité Formant une Colonie) présentes dans un produit ou sur une surface
dans le but de déterminer l’état de fraicheur d’un produit ou l’efficacité d’un traitement
thermique ou de la conservation cette recherche est donc un outil permettant de garantir une
certaine sécurité hygiénique et un certain niveau organoleptique. Ce dénombrement se fait à
30°C pendant 72 h d’incubation dans un milieu de culture bien défini.
Mode opératoire
A partir des dilutions effectuées et à l’aide d’une pipette pasteur stérile, porter aseptiquement
1ml dans une boite de pétrie contenant de la gélose PCA (Plat Count Agar) et répartir en
dessinant un huit pour permettre à l’inoculum de se mélanger a la gélose puis incuber à 30°C
pendant 72h.