Chapitre II : Matériel et méthodes
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rouges et marron, absorbant à 465-470 nm. Le changement d'absorbance est proportionnel à la
quantité de colorant lié, indiquant donc la concentration en protéines dans l'échantillon.
Contrairement aux autres méthodes de mesure des protéines, la méthode de Bradford est
moins sensible aux interférences par divers agents présents dans les échantillons de protéine.
Elle est toutefois affectée par les détergents, modifiée par le pH, et donne un résultat positif
également aux polyphénols hydrosolubles de haut poids moléculaire (tanins).
Préparation du réactif de Bradford
- Diluer le réactif de Bradford au 1/10
Préparation de la gamme étalon BSA (Bovine Serum Albumin)
- Préparer une solution mère de BSA (1mg /ml)
- Préparer une gamme de BSA de 0 à100 µg
- Ajouter le réactif de Bradford
Préparation des échantillons
- De chaque groupe d’âge 25g de la chair est additionnée de 225ml de solvant, le tout
est finement broyé.
- En même temps que la préparation de la gamme étalon, une série de tubes, contenant
différents volumes de prise d'essai de l’échantillon à doser, est préparée.
Lecture
- lire les absorbances à 595 nm
- déterminer la concentration des échantillons en protéine en utilisant la courbe étalon
II.3.5. Dosage des lipides (Méthode de Soxhlet)
Les lipides sont insolubles dans l’eau et très solubles dans les solvants organiques, tel que
l’éther éthylique et c’est cette propriété qui permet l’extraction des lipides totaux par la
méthode de Soxhlet qui est une méthode gravimétrique, puisqu’on pèse l’échantillon au
début et la matière grasse à la fin de l’extraction.
Principe
L’aliment solide est pesé et placé dans une capsule de cellulose. L’échantillon est extrait en
continu par l’éther éthylique à ébullition (T =35°C) qui dissout graduellement la matière
grasse. Le solvant contenant la matière grasse retourne dans le ballon par déversements
successif causés par un effet de siphon dans le coude latéral. Comme seul le solvant peut
s’évaporer de nouveau, la matière grasse s’accumule dans le ballon jusqu’à ce que l’extraction
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rouges et marron, absorbant à 465-470 nm. Le changement d'absorbance est proportionnel à la
quantité de colorant lié, indiquant donc la concentration en protéines dans l'échantillon.
Contrairement aux autres méthodes de mesure des protéines, la méthode de Bradford est
moins sensible aux interférences par divers agents présents dans les échantillons de protéine.
Elle est toutefois affectée par les détergents, modifiée par le pH, et donne un résultat positif
également aux polyphénols hydrosolubles de haut poids moléculaire (tanins).
Préparation du réactif de Bradford
- Diluer le réactif de Bradford au 1/10
Préparation de la gamme étalon BSA (Bovine Serum Albumin)
- Préparer une solution mère de BSA (1mg /ml)
- Préparer une gamme de BSA de 0 à100 µg
- Ajouter le réactif de Bradford
Préparation des échantillons
- De chaque groupe d’âge 25g de la chair est additionnée de 225ml de solvant, le tout
est finement broyé.
- En même temps que la préparation de la gamme étalon, une série de tubes, contenant
différents volumes de prise d'essai de l’échantillon à doser, est préparée.
Lecture
- lire les absorbances à 595 nm
- déterminer la concentration des échantillons en protéine en utilisant la courbe étalon
II.3.5. Dosage des lipides (Méthode de Soxhlet)
Les lipides sont insolubles dans l’eau et très solubles dans les solvants organiques, tel que
l’éther éthylique et c’est cette propriété qui permet l’extraction des lipides totaux par la
méthode de Soxhlet qui est une méthode gravimétrique, puisqu’on pèse l’échantillon au
début et la matière grasse à la fin de l’extraction.
Principe
L’aliment solide est pesé et placé dans une capsule de cellulose. L’échantillon est extrait en
continu par l’éther éthylique à ébullition (T =35°C) qui dissout graduellement la matière
grasse. Le solvant contenant la matière grasse retourne dans le ballon par déversements
successif causés par un effet de siphon dans le coude latéral. Comme seul le solvant peut
s’évaporer de nouveau, la matière grasse s’accumule dans le ballon jusqu’à ce que l’extraction