Chapitre 02
méthodologie
48
b. Mode opératoire :
Après hydrolyse, 20 ml d’un échantillon d’hydrolysat protéique est associé à 20 ml d’une
solution de l’acide trichloracétique (TCA) à 20 % (m/v). Le mélange est ensuite centrifugé à
6000rpm pendant 30 min afin de précipiter les protéines non hydrolysées. Le surnageant est
retiré pour analyse des protéines hydrolysés et ceci par dosage spectroscopique selon la
méthode de (Lowry et al. 1951).
Le degré d’hydrolyse est calculé selon la formule suivante :
……………(11)
PS : Protéines solubles dans TCA
PT : Protéines totaux
Le réactif de Lowry est composé du sulfate de cuivre en milieu alcalin et du FolinCiocalteu (acide phosphomolyb do-tungstique) qui en présence des protéines donne une
coloration bleue. L’analyse se fait comme suit :
Préparation des réactifs :
- Solution A : carbonate de sodiumNa 2 CO 3 (2 %) dans NaOH (0,1 N).
- Solution B : sulfate de cuivre CuSO4 (0.5%) dans tartrate double de Na et K (1 %).
- Solution C : mélange A & B ration (50 :1)
- Solution D : Réactif de Folin-ciocalteu dilué au 1/2
Analyse :
Ajouter à 1ml d’échantillon, 5ml de la solution C. Agiter et laisser reposer 10min à
température ambiante. Ajouter 0,5 ml de réactif de Folin et agiter puis incuber 30min à
l’obscurité. Laisser la réaction colorée se développer 30 min à l’obscurité, et lire l’absorbance
à 650nm. La courbe d’étalonnage (Annexe 03) est établée avec une solution de sérum
albumine bovine (BSA) dont les concentrations varient de 0-500 µg/ml.
IV. 3.2.2. Test de mise en évidence des protéines
Test xanthoprotéique
a. Principe:
La réaction xanthoprotéique est une mise en évidence de certains acides aminées (cycliques:
phénylalanine, tyrosine...) par coloration jaune à l'acide nitrique (Buruiana 1959).
DH % = (PS / PT) *100
méthodologie
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b. Mode opératoire :
Après hydrolyse, 20 ml d’un échantillon d’hydrolysat protéique est associé à 20 ml d’une
solution de l’acide trichloracétique (TCA) à 20 % (m/v). Le mélange est ensuite centrifugé à
6000rpm pendant 30 min afin de précipiter les protéines non hydrolysées. Le surnageant est
retiré pour analyse des protéines hydrolysés et ceci par dosage spectroscopique selon la
méthode de (Lowry et al. 1951).
Le degré d’hydrolyse est calculé selon la formule suivante :
……………(11)
PS : Protéines solubles dans TCA
PT : Protéines totaux
Le réactif de Lowry est composé du sulfate de cuivre en milieu alcalin et du FolinCiocalteu (acide phosphomolyb do-tungstique) qui en présence des protéines donne une
coloration bleue. L’analyse se fait comme suit :
Préparation des réactifs :
- Solution A : carbonate de sodiumNa 2 CO 3 (2 %) dans NaOH (0,1 N).
- Solution B : sulfate de cuivre CuSO4 (0.5%) dans tartrate double de Na et K (1 %).
- Solution C : mélange A & B ration (50 :1)
- Solution D : Réactif de Folin-ciocalteu dilué au 1/2
Analyse :
Ajouter à 1ml d’échantillon, 5ml de la solution C. Agiter et laisser reposer 10min à
température ambiante. Ajouter 0,5 ml de réactif de Folin et agiter puis incuber 30min à
l’obscurité. Laisser la réaction colorée se développer 30 min à l’obscurité, et lire l’absorbance
à 650nm. La courbe d’étalonnage (Annexe 03) est établée avec une solution de sérum
albumine bovine (BSA) dont les concentrations varient de 0-500 µg/ml.
IV. 3.2.2. Test de mise en évidence des protéines
Test xanthoprotéique
a. Principe:
La réaction xanthoprotéique est une mise en évidence de certains acides aminées (cycliques:
phénylalanine, tyrosine...) par coloration jaune à l'acide nitrique (Buruiana 1959).
DH % = (PS / PT) *100